目錄:廈門逸漠生物科技有限公司>>原代細(xì)胞>>兔原代細(xì)胞>> 兔臟器組織中性粒細(xì)胞
供貨周期 | 兩周 | 規(guī)格 | 5x10*5cells/T25 |
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貨號 | IMP-RA192 |
兔臟器組織中性粒細(xì)胞
產(chǎn)品基本信息
細(xì)胞名稱:兔臟器組織中性粒細(xì)胞
種屬來源:兔
組織來源:臟器組織
生長特性:懸浮生長
培養(yǎng)基::專用培養(yǎng)基
生長條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代方法:1:2至1:3,每周 2-3次
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
支原體檢測:無
細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心3-5min分鐘,棄去上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,然后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量對應(yīng)加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養(yǎng)注意事項
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議1:2傳代 。
9.注意: 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。
懸浮細(xì)胞收貨注意事項:
1、收貨時需鏡下拍照(看密度、狀態(tài))
2、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)
a.如密度50%以下,建議換液并豎瓶培養(yǎng)
b.如密度50%-80%,建議換液培養(yǎng),隔天觀察密度
c.如密度90%,建議傳代
3、換液及傳代處理前,培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(使細(xì)胞沉到瓶底);收集上清,必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集!離心轉(zhuǎn)速為1000rpm,5min。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)