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Dxy MMESSAGE MMACHINE T7 KIT 25RXNS
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  • 品牌 Invitrogen
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更新時間：2024-12-17 09:10:59瀏覽次數：29評價

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mMESSAGEmMACHINE試劑盒設計用于體外合成大量的加帽RNA
    mMESSAGE mMACHINE 試劑盒設計用于體外合成大量的加帽 RNA。加帽 RNA 能模擬體內發現的大多數真核 mRNA，因為其在 5' 末端有一個 7-甲基鳥苷帽結構。mMESSAGE mMACHINE 試劑盒反應包括超高得率轉錄反應中的帽類似物 [m7G(5')ppp(5')G]。帽類似物僅作為轉錄本的個或 5' 末端 G 摻入，因為其結構使得無法在 RNA 分子中的其他位置將其摻入。

    mMESSAGE mMACHINE 試劑盒如何工作
    mMESSAGE mMACHINE 試劑盒有簡化的反應形式，其中所有 4 個核糖核苷酸和帽類似物混合于單一溶液中。該溶液的帽類似物:GTP 比值為 4:1，這是盡可能提高 RNA 得率和加帽轉錄本比例的理想選擇。mMESSAGE mMACHINE 試劑盒是對加帽 RNA 進行卵母細胞顯微注射、體外翻譯、轉染和其他應用的常規合成的理想選擇。在存在高核苷酸濃度的情況下，通過優化 RNA 合成的反應條件來實現高得率。此外，合成的 RNA 不會被任何可能含有 RNase 抑制劑（酶混合物的組分）的污染性核糖核酸酶降解。

    使用 mMESSAGE mMACHINE 試劑盒
    在 2 小時孵育期間的 20 µL 反應中，mMESSAGE mMACHINE 高得率加帽 RNA 轉錄將產生大量的加帽 RNA。該方法獲得的得率為使用常規體外轉錄反應的 10–50 倍。帽類似物與 GTP 的比值已經過優化，能夠在得率 (15–35 µg) 和加帽轉錄本的比例 (80%) 之間實現良好折衷。mMESSAGE mMACHINE 試劑盒還包含一個 LiCl 沉淀溶液，該溶液可有效分離來自加帽 RNA 的蛋白和未摻入的核苷酸（包括自由帽類似物），提高翻譯效率。mMESSAGE mMACHINE 試劑盒僅針對與試劑盒中包含的聚合酶配合使用進行了優化。使用不同的聚合酶可能會導致得率低。mMESSAGE mMACHINE 試劑盒包含 25 次轉錄反應所需的所有緩沖液和試劑。使用試劑盒提供的對照模板（非洲蟾蜍延伸因子 1α，pTRI Xef），每次 mMESSAGE mMACHINE 反應將使用 T3 或 T7 RNA 聚合酶產生約 20–30 µg 的 RNA，或使用 SP6 RNA 聚合酶產生約 15–25 µg RNA。

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