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Mem-PER真核細胞膜蛋白抽提試劑盒
  • Mem-PER真核細胞膜蛋白抽提試劑盒
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更新時間:2024-11-20 20:39:11

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傳統(tǒng)分離膜蛋白的方法繁瑣而耗時,并且都需要梯度分離和昂貴的超高速離心儀器
    傳統(tǒng)分離膜蛋白的方法繁瑣而耗時,并且都需要梯度分離和昂貴的超高速離心儀器。而Thermo Scientific Mem-PER真核細胞膜蛋白抽提試劑盒是一種快速、簡單、便宜的膜蛋白分離方法。使用該試劑盒的三種試劑可以從培養(yǎng)的哺乳動物、酵母細胞以及軟或硬的哺乳動物組織中抽提并選擇性地富集膜蛋白。
    產(chǎn)品特點:
    • 的降低了親脂(膜)蛋白組份中參雜的親水性蛋白的交叉污染(一般< 10%)。
    • 適用于多種培養(yǎng)的哺乳動物細胞、酵母細胞以及哺乳動物組織。
    • 與SDS-PAGE、蛋白免疫印跡, 蛋白定量分析等下游應(yīng)用兼容(詳見相關(guān)產(chǎn)品)。
    • 提供簡單完整的方法,使用該方法可以在大約1小時以內(nèi)從哺乳動物細胞、組織以及酵母細胞中分離膜蛋白。
    • 僅需臺式微量離心機和離心管。
    使用Thermo Scientific Mem-PER 真核細胞膜蛋白抽提試劑盒來溶解和分離酵母膜內(nèi)蛋白(釀酒酵母菌株EGY-194)。向濕重大10-15mg的細胞沉淀中加入80μlMem-PER 試劑 A和100-150mg、尺寸為405-600μm的酸洗玻璃珠并在室溫渦旋10分鐘來破裂酵母細胞的細胞壁。短暫離心收集玻璃珠,然后將細胞裂解物轉(zhuǎn)移到新的離心管中并將離心管置于冰上。用720 μl Mem-PER試劑B和C洗滌收集的玻璃珠然后將洗滌液加入到細胞裂解液中并在冰上孵育30分鐘。樣本進行4-12%Bis-Tris凝膠電泳。
    分別對從大鼠肝(圖A)和大鼠心(圖B)制備的膜蛋白進行蛋白免疫印跡。利用蛋白免疫印跡對通過Mem-PER 試劑制備的疏水(膜蛋白)成分和相應(yīng)的親水成分進行分析,分別對VDAC (31 kDa, Affinity BioRegeants),cellugyrin (29 kDa, BDTransduction Laboratories)及flotillin-1 (48 kDa, BD Transduction Laboratories)進行免疫印跡分析。M = 膜蛋白組份,H =親水組份。
    對Thermo Scientific Mem-PER 試劑溶解的蛋白進行分級。使用Mem-PER真核細胞膜蛋白抽提試劑盒對三種細胞系的蛋白進行溶解和抽提。每組疏水(膜蛋白)和親水組分均通過標準操作獲得,利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析四種細胞定位已知的蛋白。利用SDS-PAGE/蛋白質(zhì)免疫印記分析對COX4進行分析之前,使用SDS-PAGE樣品制備試劑盒去除膜組分中的去垢劑。所有碎片組分中檢測到的蛋白污染量極低??s寫: AchE = 乙酰酯酶, COX4 =細胞色素氧化酶4亞基,hsp90 =熱休克蛋白90, M = 可溶性膜蛋白組分,H = 親水性蛋白組分。
    參考文獻
    Chattopadhyay, K., et al. (2006).J. Immunol. 177, 3920-3929
    Fujii, N., et al. (2007).Cancer Res. 67, 573-579.
    Nurnberger, J., et al. (2002). Mol. Biol. Cell.13, 3096-3106.
    Stephano, G.B., et al. (2003). Endocrinology144(4), 1234-1240.
    Tu, C-L., et al. (2008).J. Biol. Chem.283,3519-3528.Wojnar, P., et al.
    (2003). J. Biol. Chem.278(18), 16209-16215.

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