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高速逆流色譜(high-speed countercurrent chromatography,簡稱HSCCC) 是基于樣品在旋轉螺旋管內的互不混溶的兩相溶劑間分配不同而獲得分離,因而無須固體載體或支撐體,能達到在短時間內實現(xiàn)分離和制備,并且可以達到幾千個理論塔板數(shù)。
1.高速逆流色譜儀原理及特點
HSCCC利用了一種特殊的流體動力學(單向流體動力學平衡)現(xiàn)象。具體表現(xiàn)為一根100多米長的螺旋空管,注入互不相溶的兩相溶劑中的一相作為固定相,然后作行星運動;同時不斷注入另一相(流動相),由于行星運動產生的離心力場使得固定相保留在螺旋管內,流動相則不斷穿透固定相;這樣兩相溶劑在螺旋管中實現(xiàn)的接觸、混合、分配和傳遞。由于樣品中各組分在兩相中的分配比不同,因而能使樣品中各組分得到分離。
2.HSCCC的優(yōu)點
2.1 應用范圍廣,適應性好。由于溶劑系統(tǒng)的組成與配比可以是無限多的,因而從理論上講HSCCC適用于任何極性范圍的樣品的分離,所以在分離天然化合物方面具有其獨到之處。并因不需固體載體,而消除了氣液色譜中由于使用載體而帶來的吸附現(xiàn)象,特別適用于分離極性物質和其它具有生物活性的物質。
2.2 操作簡便,容易掌握。分離過程中對樣品的前處理要求低,僅需一般的粗提物即可進行HSCCC的制備分離或分析。
2.3 回收率高。由于沒有固體載體,不存在吸附、降解和污染,理論上樣品的回收率可達100%。在實驗中只要調整好分離條件,一般都有很高的回收率。
2.4 重現(xiàn)性好。如果樣品不具有較強的表面活性作用,酸堿性也不強,那么多次進樣,其分離過程穩(wěn)定性都保持很好、峰的保留相對標準偏差也小于2%,重現(xiàn)性相當好。
2.5 分離效率高,分離量較大。由于其與一般色譜的分離方式不同,能實現(xiàn)梯度操作和反相操作、亦能進行重復進樣,使其特別適用于制備性分離,產品純度高。研究結果表明:一臺普通的高速逆流色譜儀一次進樣可達幾十毫升,一次可分離近10g的樣品。因此,在80年代后期被廣泛地應用于植物化學成分的分離制備研究。
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