實(shí)驗(yàn)室透析常見問題解答（一）

Q1：如何準(zhǔn)備透析膜管？

透析膜管的準(zhǔn)備因膜管材質(zhì)和生產(chǎn)工藝的差別而有所不同。注意，我們不推薦煮沸處理，因其可能損壞膜管并改變膜孔徑。

1. 即用型RC膜，CE膜可以用DI水沖洗15-30分鐘，去除防腐劑處理液。
2. Spectra/PorR7 標(biāo)準(zhǔn)級(jí)RC膜已經(jīng)預(yù)處理，去除了重金屬和硫化物，只需在去離子水中浸泡15-30分鐘，去除*即可。
3. Spectra/PorR 1-6 標(biāo)準(zhǔn)級(jí)RC膜，一般情況下，在水中漂洗足以去除甘油或防腐劑，而對(duì)于親和研究之類極其敏感的透析應(yīng)用或者重金屬及硫化物會(huì)影響透析樣品下游分析的應(yīng)用，可能需要一些額外的處理以去除在生產(chǎn)過程中引入的痕量水平重金屬及硫化物，spectrumlabs提供兩種膜預(yù)處理溶液：及，具體產(chǎn)品信息請(qǐng)參考“”網(wǎng)頁說明。

Q2：透析的原理是什么？一般需要多長(zhǎng)時(shí)間才能完成？

透析是指溶質(zhì)在濃度梯度的驅(qū)使下，選擇性擴(kuò)散通過半透膜，從而達(dá)到大/小分子分離，膜兩側(cè)濃度平衡，即小顆粒的溶質(zhì)通過膜，而大分子物質(zhì)不能通過，被截留在膜另一邊。

如果將樣品置于透析膜管內(nèi)，通過置換膜管外部的透析緩沖液，可將小顆粒物質(zhì)清除，從而達(dá)到純化大分子物質(zhì)的目的。一般來說，一天之內(nèi)置換3-5次緩沖液，然后在室溫條件下，放在攪拌臺(tái)上隔夜透析，即可達(dá)到的透析結(jié)果。標(biāo)準(zhǔn)的透析操作一般需要16-24小時(shí)。許多因素會(huì)影響透析效率，包括：擴(kuò)散系數(shù)、pH值、溫度、時(shí)間、物質(zhì)濃度、樣品體積、透析緩沖液體積、透析緩沖液的置換次數(shù)、膜表面積、膜厚度、分子帶電荷及緩沖液攪拌速率。

Q3：透析一個(gè)樣品需要多少體積的透析緩沖液？緩沖液置換頻率怎么安排？

透析緩沖液的體積越大，小分子擴(kuò)散的驅(qū)動(dòng)力越大。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為100:1。當(dāng)擴(kuò)散速率降低，膜兩側(cè)溶液趨于平衡時(shí)，通過置換緩沖液，可維持小分子擴(kuò)散驅(qū)動(dòng)力和透析速率。我們一般推薦在12-24小時(shí)內(nèi)，置換緩沖液2到3次，具體安排如下：

*次緩沖液置換：透析開始后2-3小時(shí)

第二次緩沖液置換：透析開始后4-5小時(shí)

zui后一次緩沖液置換：透析隔夜之前

Q4：如何選擇正確的截留分子量（MWCO）？

截留分子量應(yīng)該竟可能的大，以使透析速率zui大化。但是，為了獲得zui大的樣品回收率，選擇的截留分子量應(yīng)至少為需純化的大分子物質(zhì)分子量的一半。對(duì)于需對(duì)幾種分子進(jìn)行分離的應(yīng)用，分子之間的分子量差至少為5倍，才能完成有效的膜透析。若不能滿足分子量差的要求，可能需要使用其它的分離技術(shù)，如色譜方法或切向流過濾。

Q5：哪種膜的蛋白質(zhì)結(jié)合率zui低？

每種膜對(duì)不同的分子具有不同的親和性。對(duì)于球狀蛋白，相對(duì)的結(jié)合親和性由低到高為CE< RC

Q6：怎樣為膜管選擇合適大小的膜夾？

標(biāo)準(zhǔn)RC膜（Spectra/Por 1-7）和生物技術(shù)級(jí)RC膜由柔韌的再生纖維素聚合物制造，可使用任何一種透析膜夾密封。生物技術(shù)級(jí)CE & PVDF膜由相對(duì)剛性的聚合物制造，需要使用相對(duì)溫和的通用膜夾。鑒于通用膜夾對(duì)于所有類型的膜管都能起到很好的密封作用，如不確定選擇哪種膜夾合適，使用通用膜夾即可。標(biāo)準(zhǔn)膜夾一般只用于標(biāo)準(zhǔn)級(jí)RC膜管。

膜夾的密封寬度一般需比膜管的扁平寬度長(zhǎng)4-10 mm。通用膜夾的zui小密封寬度為50 mm。對(duì)于所有扁平寬度規(guī)格的膜管，均有相應(yīng)的膜夾可供選擇。