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人激活素A (Activin A)ELISA試劑盒說明書

來源:上海西唐生物科技有限公司   2018年11月13日 14:44  

人激活素A (Activin A)ELISA試劑盒

 (用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

一、原理:

   本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 Activin A 單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 Activin A與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人Activin A,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,Activin A濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中Activin A濃度。

二、試劑盒組成(2-8℃)

酶標(biāo)板(Coated Wells

96

酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):80ng/ml

1

底物工作液(TMB Solution

12ml

抗體工作液(Biotinylated Antibody

6ml

終止液Stop Solution

12ml

三、準(zhǔn)備試劑與收集血樣:

  1. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。
  2. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 ℃-70 ℃)保存,避免反復(fù)凍融。
  3. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:81.5ml離心管,管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在管中加入80ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
  4. 洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

?四、檢測程序:

  1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置3740分鐘。
  2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。
  3. 每孔加入蒸餾水和抗體工作液各50ul(空白除外)。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃20分鐘。
  4. 洗板:同前。
  5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置3710分鐘。
  6. 洗板:同前。
  7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應(yīng)15分鐘。
  8. 每孔加入100ul終止液混勻。
  9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。

?五、結(jié)果計算與判斷:

  1. 所有OD值建議減除空白值后再行計算。如空白OD低于0.1,也可以直接計算。
  2. 以標(biāo)準(zhǔn)品80004000200010005002501250 pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),使用軟件作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  3. 根據(jù)樣品OD值計算出相應(yīng)Activin A含量即可。軟件可以向本公司郵件索取。

?六、試劑盒性能:

 1. 靈敏度小的Activin A 檢測濃度小于62pg/ml。     

2.特異性:可同時檢測重組或天然的人Activin A不與其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。                         

3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

七、注意事項:

  1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.   洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯誤地升高。

3.   檢測時所有試劑都要恢復(fù)到室溫板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。

 4.   試劑盒使用超敏TMB溶液若顯色過深會出現(xiàn)絮狀物屬正常現(xiàn)象,不影響結(jié)果判讀

5.   說明書中試劑盒組成為96T的量48T的量應(yīng)減半。

6.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。僅用于科研,不能用于臨床診斷!

     

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