檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 常量可見(jiàn)分光光度法 說(shuō)明 技術(shù) 文章
檸檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)試劑盒
商品貨號(hào):QS1005
英文名稱:Citrate Synthase(CS)Assay Kit
別名:檸檬酸合酶試劑盒 CS Kit 檸檬酸合酶(CS)試劑盒 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒,生化法試劑盒
檢測(cè)方法:常量法
商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià) | 選擇規(guī)格 |
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QS1005-25管/24樣 | 25管/24樣 | ¥2000.00元 | ||
QS1005-50管/48樣 | 50管/48樣 | ¥3200.00元 |
測(cè)定意義:
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。
測(cè)定原理:
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。
貨號(hào): QS1005-50 規(guī)格:50管/48樣
檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒說(shuō)明書
分光光度法
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。
測(cè)定原理:
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水
試劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:液體10mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:液體1mL×1 支,-20℃保存;
試劑四:液體50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑×2 支,4℃保存,臨用前加入800μL 無(wú)水乙醇,用不完的試劑4℃保存一周;
試劑六:粉劑×4 支,-20℃保存,臨用前加入400μL 蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑七:粉劑×2 支,-20℃保存,臨用前加入800μL 蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
- 稱取約0.1g 組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL 試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 將勻漿600g,4℃離心5min。
- 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
- 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。
- 在步驟(4)中的沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3 秒,間隔10 秒,重復(fù)30 次),用于線粒體CS 測(cè)定。
- 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm,蒸餾水調(diào)零。
- 將試劑四、五、六和七在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
- 樣本測(cè)定
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 |
試劑四 | 780 |
試劑五 | 30 |
試劑六 | 30 |
樣本 | 30 |
試劑七 | 30 |
將上述試劑按順序加入1 mL 玻璃比色皿中,加試劑七的同時(shí)開始計(jì)時(shí),在412nm 波長(zhǎng)下記錄20 秒時(shí)的初始吸光度A1 和反應(yīng)2min 后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。
CS 活性計(jì)算:
- 按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。
CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
- 按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。
CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=222.2×ΔA÷W
- 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。
CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.4444×ΔA
V 反總:反應(yīng)體系總體積,9×10-4 L;ε:TNB 摩爾消光系數(shù),1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.03 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬(wàn)。
輔酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
QS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
MS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS1005 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
MS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
QS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
MS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |
相關(guān)產(chǎn)品
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