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檸檬酸合酶測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術 文章

來源:上海索寶生物科技有限公司   2019年04月02日 10:53  

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檸檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)試劑盒

商品貨號:QS1005
英文名稱:Citrate Synthase(CS)Assay Kit
別名:檸檬酸合酶試劑盒 CS Kit 檸檬酸合酶(CS)試劑盒 檸檬酸合酶(CS)測試盒,生化法試劑盒
檢測方法:常量法

 

商品貨號:商品品牌:規格基本售價選擇規格
QS1005-25管/24樣 25管/24樣¥2000.00元 
QS1005-50管/48樣 50管/48樣¥3200.00元 

測定意義:                           

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

 

貨號:QS1005-25                                                   規格:25管/24樣

檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒說明書

可見分光光度法

注意:正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:                          

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環個限速酶,是三羧酸循環主要調控位點之一。

測定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體25mL×1瓶,-20℃保存;

試劑二:液體5mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體0.5mL×1支,-20℃保存;

試劑四:液體25mL×1瓶,4℃保存;

試劑五:粉劑×1支,4℃保存,臨用前加入800μL無水乙醇,用不完的試劑4℃保存一周;

試劑六:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前加入400μL蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

試劑七:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入800μL蒸餾水,用不完的試劑仍-20℃保存;

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

  • 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  • 將勻漿600g,4℃離心5min。
  • 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
  • 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。
  • 在步驟④中的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體CS測定。

測定步驟:

1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至412nm,蒸餾水調零。

2、將試劑四、五、六和七在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min。

3、樣本測定

試劑名稱(μL)

測定管

試劑四

780

試劑五

30

試劑六

30

樣本

30

試劑七

30

將上述試劑按順序加入1 mL玻璃比色皿中,加試劑七的同時開始計時,在412nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1和反應2min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。

CS活性計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=222.2×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。

CS(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.4444×ΔA

V反總:反應體系總體積,9×10-4 L;ε:TNB摩爾消光系數,1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.03 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。

 

 

輔酶Ⅰ系列    
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MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
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MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
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MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒微量法100管/96樣800
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MS1010NAD激酶(NADK)測試盒微量法100管/48樣1100
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