③ 用另一支無菌注射器從1號瓶內(nèi)抽取0.5 ml經(jīng)充分振搖后的水樣注入2號瓶內(nèi)稀釋，充分振搖，待用；

       ④ 再用一支無菌注射器從2號瓶中內(nèi)抽取0.5ml經(jīng)充分振搖后的水樣注入3號瓶內(nèi)稀釋，充分振搖，待用；

⑤ 依次類推稀釋直到zui后一瓶為止，待用。

       ⑥ 將上述所有稀釋過的測試瓶放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，按表１進(jìn)行細(xì)菌生長的鑒別。

表１　　細(xì) 菌 生 長 的 鑒 別 方 法

四、細(xì)菌量計(jì)量：

１．在一定溫度下培養(yǎng)一定時間后，按瓶號列出稀釋梯度，并根據(jù)細(xì)菌瓶陽性反應(yīng)的個數(shù)，確定生長指標(biāo)和級數(shù)（參見附錄及示例）．

２．根據(jù)生長指標(biāo)查表２或表３，確定細(xì)菌量基數(shù)并乘以級數(shù)，即為細(xì)菌量總數(shù)。

　　　　　　　　細(xì)菌量總數(shù)＝細(xì)菌量基數(shù)×級數(shù)

二組平行樣重復(fù)試驗(yàn)查表２

　　三組平行樣重復(fù)試驗(yàn)查表３

3、細(xì)菌量總數(shù)結(jié)果報(bào)告示例見表４

五、注意事項(xiàng)

1、測試瓶中若有白色沉淀為過量營養(yǎng)成份，屬正常現(xiàn)象，不影響測試。

2、常溫條件下，測試瓶儲存有效期為一年。

3、測試瓶經(jīng)稀釋后，一定要用力振搖1~2分鐘，以保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。 

表２  二 次 重 復(fù) 細(xì) 菌 量 基 數(shù) 表

表３    三 次 重 復(fù) 細(xì) 菌 量 基 數(shù) 表

表４  細(xì) 菌 量 總 數(shù) 結(jié) 果 報(bào) 告 示 例 表

附錄

一、        生長指標(biāo)的確定原則．

１．全部呈陽性反應(yīng)的zui后一列平行樣應(yīng)為生長指標(biāo)的*位數(shù)．

２．同一平行樣，有Ｘ個陽性反應(yīng)瓶，生長指標(biāo)即為Ｘ． 

二、級數(shù)的確定原則

１．全部呈陽性反應(yīng)的zui后一列平行樣的瓶號數(shù)減去１，即為級數(shù)ｎ，以１０^ｎ表示．

　２．１號瓶的２或３個平行樣未全部發(fā)生陽性反應(yīng)時，級數(shù)為０，即為１０^０ 

 示例１

①   ②   ③   ④   ⑤

+     -    -    -    -

+     +    -    -    -

+     +    +    -    -

生長指標(biāo)：　３　　２　１

級　　數(shù)：　１０^０（①－１＝０）

　示例２

            ①   ②   ③   ④   ⑤

            +    +     +    -    -

            +    +     +    -    -

            +    +     +    +    +

生長指標(biāo)：　　　　　３　　１　１

　級　　數(shù)：　１０^２　（③－１＝２）

示例３　

　　　　　　①　　②　　③　　④　　⑤

　　　　　　+　　　+　　-　　　+　　-

　　　　　　+　　　+　　+　　　-　　-

生長指標(biāo)：　　　　２　　１　　１

級　　數(shù)：　１０^１　（②－１＝１）

示例４　

　　　　　①  ②  ③  ④  ⑤

　　　　　-   +   -   -   -

　　　　　+　 -　 +　 -　 -

生長指標(biāo)：１　 １　１

級　　數(shù)：　１０^０　

細(xì)菌測試瓶測試方法及結(jié)果報(bào)告示例

例、做三個平行樣重復(fù)試驗(yàn)，每個樣稀釋5個梯度：

      ①    ②    ③    ④    ⑤

①^／   ②^／   ③^／   ④^／   ⑤^／

①＂  ②＂  ③＂  ④＂  ⑤＂

即分別在① ①^／①＂號瓶中注入0.5ml水樣，搖勻后取出0.5ml再分別注入② ②^／②＂號瓶中；搖勻后取出0.5ml再分別注入到③ ③^／③＂號瓶中，依次類推，直至⑤ ⑤^／⑤＂號瓶。

在恒溫下放置一定時間后（大腸菌群37℃，24小時）觀察測試瓶陽性（變色）反應(yīng)個數(shù)。

例1、（打√者為陽性反應(yīng)---以+表示）    

      ①_√    ②      ③     ④    ⑤           

①^／_√   ②^／_√   ③^／_√  ④^／   ⑤^／      

①＂_√  ②＂_√  ③＂  ④＂  ⑤＂  

即

則此生長指標(biāo)為321，級數(shù)為0。查三次重復(fù)計(jì)數(shù)表。321對應(yīng)的細(xì)菌量為15個/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為：15×10⁰=15個/ml。

例2、 

①_√    ②_√       ③_√   ④    ⑤         

①^／_√   ②^／_√   ③^／_√  ④^／   ⑤^／ 

①＂_√  ②＂_√  ③＂  ④＂_√ ⑤＂       

即  

則此生長指標(biāo)為321，級數(shù)為1。查三次重復(fù)計(jì)數(shù)表。321對應(yīng)的細(xì)菌量為15個/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為：15×10¹=150個/ml。

例3、

①     ②_√        ③     ④    ⑤        

①^／_√   ②^／_√  ③^／_√   ④^／   ⑤^／         

①＂   ②＂   ③＂    ④＂  ⑤＂      

  即 

則此生長指標(biāo)為121，級數(shù)<0。查三次重復(fù)計(jì)數(shù)表。121對應(yīng)的細(xì)菌量為1.5個/ml。此系列報(bào)告結(jié)果為：≤1.5×10⁰既≤1.5個/ml。

例4、  ①_√     ②_√         ③_√   ④_√   ⑤_√                 

①^／_√    ②^／_√   ③^／_√  ④^／_√  ⑤^／_√  即          

①＂_√   ②＂_√   ③＂_√ ④＂   ⑤＂     

例4中的生長指標(biāo)第1位數(shù)3對應(yīng)③ ③^／③＂號瓶

   依次類推。

④ 如果*列（① ①^／①＂號瓶）未全部發(fā)生陽性反應(yīng)，報(bào)告結(jié)果應(yīng)注明“≤”，如例3；如果至zui后一列（⑤ ⑤^／⑤＂號瓶）全部發(fā)生陽性反應(yīng)，報(bào)告結(jié)果應(yīng)注明“≥”，（如例5）。此情況下說明細(xì)菌量大，應(yīng)增加測試瓶的個數(shù)，以求得較準(zhǔn)確的結(jié)果。

⑤ 測試瓶注入水樣（稀釋）后應(yīng)用力振搖，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性；逐級稀釋水樣時，應(yīng)更換無菌注射器，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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