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ELISA操作步驟

來(lái)源:上海西唐生物科技有限公司   2008年12月18日 16:01  

大鼠干擾素-r(IFN-r)定量EIA試劑盒使用說(shuō)明

原理
本實(shí)驗(yàn)采用ABC-HRP方法。用抗大鼠IFN-r單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IFN-r與單抗結(jié)合,高靈敏檢測(cè)樣品中IFN-r的含量。
試劑盒組成
1. 48孔微孔板: 一塊
2. 樣品稀釋液:一瓶 6ml
3. *抗體工作液:一瓶 4ml
4. 酶標(biāo)抗體工作液: 一瓶 6ml
5. 終止液:一瓶 6ml
6. 洗滌液(25 x):一瓶 25ml
7. 標(biāo)準(zhǔn)品:一管/二管 用前加樣品稀釋液250ul溶解,溶解后4度可保存一周
8. 底物液A:一瓶 6ml
9. 底物液B:一瓶 6ml
10. 坐標(biāo)紙: 一張
11. 封板紙 一張
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 洗滌液:用重蒸水1:25稀釋
2. 收集血液標(biāo)本:采集血清盡早檢測(cè),2-8oC保存一天;需更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20 oC)保存,避免反復(fù)凍融。
檢測(cè)程序
1. 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔,每孔中各加入樣品稀釋液100ul,*孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul,混勻后用加樣器吸出100ul,移至第二孔。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋至第六孔,zui后,從第六孔中吸出100ul棄去。第七孔為空白對(duì)照,第八孔為零孔。
2. 加樣:待測(cè)品孔每孔各加入待測(cè)樣品100ul混勻。
3. 將反應(yīng)板充分混勻后粘上封板紙置37 oC 120分鐘。
4. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。
5. 每孔(除零孔)加*抗體工作液50ul,置37℃ 60分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔(除零孔)加酶標(biāo)抗體工作液100ul(兩滴),將反應(yīng)板置37 oC 60分鐘。
8. 洗板:同前。
9. 每孔加入底物液A、B各一滴,置37 oC避光反應(yīng)15分鐘。
10. 每孔加入1滴終止液混勻。
11. 在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除零孔值后再行計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品500、250、125、62.5、31.3、15.6、0 pg/ml之OD值在雙對(duì)數(shù)紙上作圖,畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。通過(guò)標(biāo)本的OD值可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出其濃度。或使用計(jì)算機(jī)軟件,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),計(jì)算樣品含量。
注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待查樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
2. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。有效期6個(gè)月。
3. 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用,溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。
4. 本試劑盒含2M硫酸,不要將它與含*的廢物混在一起。
5. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。
6. 本試劑盒僅供研究用。

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