色譜柱的關鍵內容是制備出高效的填料,這些填料制成的色譜柱既要有好的選擇性,又要有高的柱效,要提高柱效是現代高效液相色譜的又一關鍵問題。
但是色譜填料的選擇范圍很寬,有聚合物基質填料、硅膠基質填料和其它無機填料。所以要選擇合適的色譜填料,必須對此有一定的認識和了解。
色譜柱填料應該如何選擇和裝填?咱們細細來講。
1、硅膠基質填料
硅膠是HPLC填料普遍常用的基質。除了具有無機物基質共有的高強度,還提供了一個良好得表面,可以通過成熟的硅烷化技術鍵合范圍很廣的配基,制成反相、離子交換、疏水作用、親水作用或分子排阻填料。硅膠基質填料適用廣泛的溶劑,從極性到非極性。其缺點是在水溶性堿性流動相中不穩定。通常,硅膠基質的填料推薦的常規分析pH范圍為2~8。
2、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其優點是在PH值為1~14均可使用。相對于硅膠基質的C18填料,這類填料具有較強的疏水性,而且大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效。其缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。
3、其他無機填料
其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化由于其特殊的性質,一般僅限于特殊的用途。
如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體,由于在HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強,可制成穩定的色譜柱柱床,其優點是可以在pH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強,應用范圍受到一定限制,所以未能廣泛應用。
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