1、脂質體轉染法：

陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內，形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞進入細胞。脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前實驗室的轉染方法之一，其轉染率較高，優于磷酸鈣法。由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。常用細胞類型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。

優點：操作簡單、轉染率高、可轉染DNA、RNA蛋白質。

缺點：有些細胞系不容易轉染，需要進行條件優化，

2.電穿孔轉染法：

電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70% 的細胞。現在針對細胞死亡開發出了一種電轉保護劑，可以大大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率。

優點：原理簡單、不需要載體、不限制細胞類型和條件，

缺點：需要特殊的設備，對細胞傷害很大，細胞死亡率高。

3、病毒感染：

對于脂質轉染于電穿孔轉染都無法成功轉染的細胞建議用病毒感染，此法可以快速100%感染，檢測成功率高。

優點：高轉染效率，適用于較難轉染的細胞系，可用于體內轉染。

缺點：技術難度高，構建重組蛋白是費時，存在生物安全問題，基因插入大小受限。

4、磷酸鈣共沉淀法：

該方法可重復性差，而且磷酸鈣溶液對溫度，PH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感，對細胞尤其是原代細胞毒性較大，也不能采用RPMI培養基，因為其含有高濃度的磷酸鹽。

優點：便宜且容易獲得，轉染效率高，適用于生產是和穩定的蛋白質。

缺點：可重復性較差，不適用于動物體內轉染，有細胞毒性，尤其對原代細胞

組織培養試劑：

基礎培養基—目前所使用的各種市售培養基(如，RPMI 1640和DMEM)。培養基的成分包括營養物質(氨基酸，葡萄糖)，維生素，無機鹽，和緩沖物質。有些成分非常不穩定，因此如果不在使用時新鮮加入就可能會產生問題。務必要使培養基避光保存。因為已知有一些組分和緩沖物質，如HEPES，當暴露于光照下就會分解產生細胞毒性物質。另外，血清，添加劑，來自于培養箱內的污染物、化學物質，或真菌/細胞的污染也都可能影響到細胞生理。

細胞生長狀態：

密切觀察細胞，確保它們狀態良好，貼壁細胞相比較懸浮細胞—在轉染效率方面貼壁細胞和懸浮細胞之間的差異顯著，天生趨于懸浮的細胞非常難以轉染，相反，天生為貼壁的細胞則可適應懸浮生長的條件，

載體DNA：

載體的完整性是載體是否具有功能取決于他結構的完整性，轉染效率受到質粒制備物的超螺旋結構和舒展結構之間比列、涮螺旋終端、核酸酶的降解，以及來自于儲存和處理過程中的物理壓力的影響。