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細(xì)胞難伺候,你真的會(huì)選培養(yǎng)基嗎?
培養(yǎng)基的配制
培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。
在制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分進(jìn)行配制。脫水培養(yǎng)基應(yīng)附有處方和使用說(shuō)明，配制時(shí)應(yīng)按使用說(shuō)明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求，不得使用結(jié)塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下儲(chǔ)存，如低溫、干燥和避光，所有的容器應(yīng)密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應(yīng)附有處方和使用說(shuō)明外，還應(yīng)注明有效期、貯存條件、適用性檢查試驗(yàn)的質(zhì)控菌和用途。
為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應(yīng)準(zhǔn)確稱(chēng)量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基常用的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應(yīng)記錄各稱(chēng)量物的重量和水的使用量。配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應(yīng)潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來(lái)物質(zhì)的殘留。對(duì)熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無(wú)菌性。
脫水型培養(yǎng)基應(yīng)*溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時(shí)若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過(guò)度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其它組分時(shí)，加入后應(yīng)充分混勻。
應(yīng)按照生產(chǎn)商提供或使用者驗(yàn)證的參數(shù)進(jìn)行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過(guò)濾除菌。
培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過(guò)無(wú)菌性試驗(yàn)和促生長(zhǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外，對(duì)高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過(guò)熱，過(guò)度滅菌可能會(huì)破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證。,
應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH（冷卻至室溫25℃測(cè)定）。若培養(yǎng)基處方中列出pH的范圍，除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的pH允許的變化范圍很寬，否則，pH的范圍不能超過(guò)規(guī)定的±0.2。
制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。應(yīng)檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無(wú)菌檢查。
培養(yǎng)基的貯存
自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱(chēng)、批號(hào)、配制日期等信息，并在已驗(yàn)證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有名稱(chēng)、批號(hào)、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性，生產(chǎn)商和使用者應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說(shuō)明書(shū)上的要求進(jìn)行保存，所采用的保藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。
培養(yǎng)基滅菌后若儲(chǔ)藏在高壓滅菌器中，質(zhì)量可能會(huì)受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在0℃或0℃以下存放，因?yàn)槔鋬隹赡芷茐哪z特性。
培養(yǎng)基應(yīng)避光保存，若要長(zhǎng)期保存，應(yīng)置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過(guò)一周，且應(yīng)密閉包裝，若延長(zhǎng)保存，保存期需經(jīng)驗(yàn)證確定。
固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許一次，以避免因過(guò)度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用的水浴加熱或流通蒸汽。若使用微波爐，應(yīng)避免培養(yǎng)基過(guò)度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應(yīng)置于45～50℃的水浴中，不得超過(guò)8小時(shí)。傾注培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進(jìn)入培養(yǎng)基中造成污染。
使用過(guò)的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應(yīng)按照國(guó)家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理。
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