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大鼠組胺（Histamine）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中組胺（Histamine）的含量。
使用目的
本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中組胺（Histamine）的含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠組胺（Histamine）水平。用純化的大鼠組胺（Histamine）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入組胺（Histamine），再與HRP標記的組胺（Histamine）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺（Histamine）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠組胺（Histamine）濃度。
注意事項
1. 本試劑盒僅用于科研，不得用于醫學診斷。
2. 使用試劑盒前，請仔細閱讀說明書，以試劑盒內的說明書為準，請務必理解說明書內容。
3. 酶標包被板屬于可拆型，開封后如未用完，板條應裝入鋁箔袋密封并2-8°C保存。
4. 加樣樣本和試劑應盡快完成。
5. 為了讓測試結果更準確，盡可能混勻酶標板孔中所加試劑，酶標板不能反復使用。
6. 避免實驗過程中酶標板干燥；清洗后盡快加試劑。
7. 實驗開始，所有試劑應平衡到室溫 （21-26°C） 后方可進行。溫度會影響吸光度值，但不影響樣本值。
8. 切忌用口加樣，以免試劑和樣本粘到皮膚和粘膜上。
9. 不要在處理樣本或試劑的區域抽煙、吃東西、喝酒或化妝。
10. 操作時帶一次性手套，微生物的污染會影響實驗結果的正確性。
11. 操作應按照國家規定的安全條列進行。
12. 過期的試劑盒切勿再使用。
13. TMB 底物對皮膚有刺激性，不慎入眼，立即用大量水沖洗，皮膚上不慎接觸到也應立即用肥皂，并用大量的水沖洗。試驗中被污染的物品在下次使用前應盡快清洗。
14. 配置的化學品或使用后的試劑，根據國家微生物安全條列都視為危險廢物。
試劑盒組成
| 說明書 | 1 | |
| | 2 | |
| 酶標包被板 | 12孔×8條 | 2-8℃ |
| 標準 | 0.5ml×1 瓶 0 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.3 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.6 ng/ml 0.5ml×1瓶 1.2 ng/ml 0.5ml×1瓶 2.4 ng/ml 0.5ml×1瓶 4.8 ng/ml | 2-8℃ |
| 生物素標記的抗Histamine抗體 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 終止液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 2-8℃ |
需要而未提供的試劑和器材
1. 吸光度值在450nm波長下檢測的酶標儀。
2. 1-2ml的加樣器。
3. 100 ml和1L的量筒。
4. 吸水紙。
5. 37°C恒溫箱。
6. 蒸餾水或去離子水。
7. 數據分析和繪圖軟件，圖紙。
8. 標準和樣品稀釋的試管。
儲存條件
1. 有效期內的試劑如開封后未用完，請2-8°C 保存。
2. 過期的試劑請不要用，打開后的試劑2-8°C 保存。
3. 酶標包被板必須2-8°C 保存，如有未用完的酶標包被板，打開的鋁箔袋須密封并2-8°C 保存。
4. 開封后的試劑盒2-8°C只能保存8周。
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。
樣本處理及要求
血清-用采血管收集血液，室溫血液自然凝固30分鐘，1000 xg離心15分鐘左右，收集上清，盡早進行實驗，或者分裝后-20°C或 -80°C 保存。
血漿-收集好的血漿根據要求選擇EDTA或者肝素作為抗凝劑，2-8°C 1000 xg離心15分鐘左右，30分鐘內收集好，-20°C或 -80°C 保存，避免反復凍融。
細胞上清及相關液體-收集好的樣本離心后應盡快實驗，或者分裝后-20°C或 -80°C 保存，避免反復凍融。
注意事項
1. 所有試劑和樣本使用前必須在室溫下平衡，混勻試劑時不應起泡沫。
2. 一旦實驗開始，各操作步驟都應盡快完成。
3. 避免重復使用手中的吸頭和試管，以免交叉污染。
4. 一般情況，酶的反應與時間和溫度成正比。
操作步驟
1. 加標準品：在酶標包被板上設標準品孔，依次加入不同濃度的標準品50ul（建議每個濃度做2個平行孔）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品、生物素標記的抗Histamine抗體及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl，然后再加生物素標記的抗Histamine抗體10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行
實驗結果計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，即為樣品的實際濃度。
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