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| 尺寸排阻色譜柱的清洗方法 分子尺寸排阻色譜柱吸附的主要原因 用于高分子分子量測(cè)定的分子尺寸排阻（SEC）色譜柱有SuperAW系列、α系列、PW·PL系列等產(chǎn)品。柱中填充介質(zhì)與樣品間常會(huì)發(fā)生： （1）離子性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質(zhì)，由于羧基帶有負(fù)電荷（盡管非常少），樣品中帶有正電荷的組分將會(huì)與其發(fā)生離子吸附作用。 （2）疏水性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質(zhì)，會(huì)與一些疏水性較高的樣品（如：具苯環(huán)物質(zhì)）發(fā)生疏水吸附作用。 硅膠基質(zhì)的填料，常會(huì)與一些難溶性膜蛋白等疏水性物質(zhì)發(fā)生疏水性吸附作用。另外，殘存的硅醇基會(huì)與堿性物質(zhì)間發(fā)生離子吸附。對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料，雖然不是發(fā)生吸附作用，但必須考慮酸性條件下官能團(tuán)會(huì)發(fā)生脫落或堿性條件下硅膠基質(zhì)會(huì)發(fā)生溶解的情況。 分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法 ☆樹脂基質(zhì)分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法 1、離子性吸附:對(duì)于陽離子性吸附物質(zhì)，通過提高鹽濃度進(jìn)行過柱清洗。（1mol/L的醋酸緩沖液） 2、疏水性吸附:對(duì)于疏水性吸附物質(zhì)，可通過提高有機(jī)溶劑的濃度（PW·PL：50%、α及SuperAW：100%可）進(jìn)行過柱清洗。 3、復(fù)合吸附:對(duì)于陽離子性·疏水性物質(zhì)的去除，可提高鹽濃度進(jìn)行過柱，水洗后，提高有機(jī)溶劑濃度進(jìn)行過柱。 ☆硅膠基質(zhì)分子尺寸排阻 1、堿性物質(zhì)的去除（離子性吸附）；通過提高淋洗液的鹽濃度（通常0.5mol/L）進(jìn)行過柱清洗。 2、疏水性吸附的去除（疏水性吸附）；在淋洗液中添加甲醇、乙腈（10-20%）等水溶性有機(jī)溶劑進(jìn)行過柱清洗。本法請(qǐng)注意緩沖液中鹽的析出。 3、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性劑；在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性劑（Triton、Tween、Brij等）后進(jìn)行過柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留。 一般來說，清洗時(shí)間可選擇為過柱5-10個(gè)柱體積便可。在附吸成分其吸附力*時(shí)，即使進(jìn)行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復(fù)。另外，請(qǐng)充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。 反相硅膠 反相硅膠色譜柱吸附的主要原因 反相硅膠柱填充介質(zhì)（固定相）與樣品間常常會(huì)發(fā)生下列吸附現(xiàn)象： （1）殘存硅醇基與堿性物質(zhì)間的離子吸附； （2）硅膠表面的金屬雜質(zhì)與金屬配位物質(zhì)間的吸附； （3）疏水性*的物質(zhì)在柱中的蓄積。以上現(xiàn)象，會(huì)引起反相色譜柱柱效下降、拖尾、重復(fù)性不良等狀況的發(fā)生 反相硅膠 反相硅膠——疏水性物質(zhì)的去除: 使用有機(jī)溶劑（乙腈、甲醇、乙腈與THF的混合溶劑）進(jìn)行清洗。 考慮樣品成分對(duì)于有機(jī)溶劑的溶解性，選用比淋洗液濃度高的有機(jī)溶劑、或選用極性較低的有機(jī)溶劑進(jìn)行過柱清洗。這種情況下，有必要注意淋洗液中鹽的析出現(xiàn)象。 反相硅膠——堿性物質(zhì)（金屬配位物質(zhì)）的去除: 使用酸性水溶液與有機(jī)溶劑的混合液（0.1%磷酸、0.1%TFA/乙腈、甲醇的混合液）進(jìn)行過柱清洗。 *一般來說，清洗時(shí)間可選擇為過柱5-10個(gè)柱體積便可。在附吸成分其吸附力*時(shí)，即使進(jìn)行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復(fù)。另外，請(qǐng)充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。 |
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