上期文章我們深入探討了熱原與細菌內毒素檢測從取樣到處理的詳盡流程，本期文章繼續揭開質量控制領域的神秘面紗。第二期將聚焦于檢測方法的靈活性探討、轉換流程的優化策略，以及細菌內毒素限值設定的最新動態，為您呈現更多關于這一關鍵質量控制環節的深度解析。

Q1：對于藥典收載的產品，制藥公司是否可以采用替代測試方法？

可以。如果制藥公司提供方法的準確度、靈敏度、精密度、選擇性或者適用性，在自動化或者計算機數據簡化、和其他特殊環境下具有優勢，制藥公司可以采用替代方法或者規程。這樣的替代方法或者規程應該根據USP通則<1225>“藥典方法驗證”的要求來驗證，并且應該證實具有等效效果或者更好的分析效果。在出現差異或爭議時，除非在藥品專論中另有說明，否則最終結論應該基于USP藥典凝膠法來得出。

下面是替代測試的例子。

1. 單核細胞激活類型熱原測試

有必要進行產品專屬性驗證以確認特定測試物質或物料是否適用于單核細胞激活方法是合適的。驗證應該包括，但是不限于干擾測試、單個測試樣品的熱原準確度測試；對于醫療器械，測試系統和單核細胞直接相關的能力。

2. 使用重組試劑的細菌內毒素測試

在2024年7月26日，美國藥典（USP）微生物專家委員會正式宣布，將第<86>章“使用重組試劑的細菌內毒素測試”納入《美國藥典-國家處方集》（USP-NF）。該章節的最終文本預計將于2024年11月公布，以供行業提前采用，并定于2025年5月正式生效。

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Q2：當從一種細菌內毒素測試轉換為另外一種方法時，最-好-的流程是什么?

測試相同實體（例如LAL系列）的測試方法的轉換可以通過比較這2種測試方法來證實新方法的等效性。基礎工作是比較檢測限度和抑制/增強能力。新方法的靈敏度可以通過加入產品樣品來評估。另外在使用插標法時，一連串的產品局部樣品被發現顯示陽性可能對于比較這個方法的結果來說是好的源頭。分析方法驗證應該試圖說明方法正常使用中和制造環境中發現的變異性（例如原始物料或者季節變化）。

對于藥品，獸藥和生物制品而言，應該在PAS（優先批準補充）中遞交新方法的轉換資料。或者，若公司已建立方法轉換的一般規程，也可選擇通過PAS-CP（比較方案）提交資料以供審核。比較方案應該詳細描述用于建立新方法等效性方法使用的檢測和標準。比較方案批準后，方案實施結果可按減少的報告類別的程序直接報告（補充-正在實施的變更或年度報告或特別報告21 CFR 314.80）。公司應該保存研究方案、最終報告和所有數據以便FDA審核。在遞交比較方案之前，公司應與正確的審查部門確認申報流程。

對于3類醫療器械，過渡到新的檢測方法需要根據 21CFR 814.39（e）提交30天的通知。具體要求參見FDA's guidance,Modifications to Devices Subject to Premarket Approval （PMA）-The PMA Supplement Decision-Making Process.

對于1類和2類醫療器械的制造變更，應該根據質量體系法規和21 CFR 820進行。設計控制、生產和過程控制要求見21 CFR 820.30、21CFR 820.70、21 CFR 820.72 和21 CFR 820.75。

對于醫療器械的質量控制測試，包括入廠部件、原材料、中間產品、成品以及非無菌樣品滅菌前的最終產品熱原測試，則需要提前30天通知。醫療器械制造商應證明其靈敏度與器械的給藥途徑和身體接觸類型相一致。在證明方法與USP參考標準之間具有可重復的相關性后，制造商可以使用另一種細菌內毒素檢測方法。

Q3：1987指南中附錄E中細菌內毒素限值發生了什么變化?

自1987 年《指南》發布以來，由于劑量和藥品規格的大量增加，細菌內毒素限值表已經過時。確定細菌內毒素限值的適當方法是使用USP或AAMI標準中提供的計算方法。藥典各論中的限值也可能沒有考慮到當前的產品規格或者劑量，也應使用標準中建議的計算方法對其進行檢查。

如果成品中含有多種成分，則無論單個成分的細菌內毒素限值如何，腸外給藥產品的總細菌內毒素限值不應超過USP<85>細菌內毒素測試中規定的總限值。鞘內給藥產品、眼藥產品或醫療器械（有關器械，請參閱問題11）的細菌內毒素限值要求可能不以腸外給藥產品的計算方法為基礎。FDA建議企業向有關辦公室或審查部門來核實討論這些產品的細菌內毒素。

Q4：如何采用QbD概念支持細菌內毒素限值?

當實施QbD（Quality by Design）“質量源于設計”概念時，細菌內毒素測試的策略應該基于產品和工藝理解，并結合風險管理來確保最終產品質量的穩定如一。應該采用恰當的中控測試來評估可能受到細菌內毒素形成或者侵入風險的生產過程區域，很多公司已經具備相關項目來監控購入的物料和組分,包括工藝用水的細菌內毒素污染。

當確定每個制造階段中控測試限值時，應該考慮最終成品的放行標準。為了評估產品污染的相對風險，定量檢測可能優于限值檢測，以促進產品質量趨勢，并在細菌內毒素超過標準和導致產品不合格之前發現和糾正偏離情況。

細菌內毒素限值應視具體情況而定，并將作為每份相關上市申請或補充材料的一部分進行評估。

無論是替代測試方法的驗證、檢測方法的轉換流程，還是內毒素限值的科學設定，都離不開對產品特性和工藝流程的深刻理解。這一系列的探討不僅加深了我們對熱原與細菌內毒素檢測的理解，更為制藥和醫療器械行業提供了寶貴的實踐指導。更多前沿知識、最新法規解讀及案例分析將在后續文章中逐一呈現，敬請期待后續精彩內容！