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豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒使用說明

來源:上海雅吉生物科技有限公司   2024年10月21日 08:09  

豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒使用說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名:豬瘟病毒阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒

英文名:Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yù)期用途】 豬瘟是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的豬的一種高度接觸性、出血性和致死性傳染病,其特征為高熱稽留和微血管壁變性而引起的廣泛出血、壞死、梗塞等,慢性以纖維素壞死性腸炎為特征

本試劑用于檢測(cè)豬血清中豬瘟病毒抗體,可用于豬瘟病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià)

【試劑盒組成】

序號(hào)

名稱

規(guī)格/96T×1

規(guī)格/96T×2

規(guī)格/96T×5

1

酶標(biāo)記物

11ml×1(紅蓋)

11ml×2(紅蓋)

26ml×2(紅蓋)

2

樣品稀釋液

25ml×1(黃蓋)

50ml×1(黃蓋)

125ml×1(透明)

3

20X濃縮洗滌液

40ml×1(白蓋)

40ml×1(白蓋)

200ml×1(透明)

4

底物顯色液

10ml×1(黑蓋)

10ml×2(棕蓋)

25ml×2(黑蓋)

5

終止液

5ml×1(黃蓋)

10ml×1(黃蓋)

25ml×1(黃蓋)

6

陽(yáng)性對(duì)照

1.0 ml×1(紅蓋)

1.5 ml×1(紅蓋)

2.0 ml×1(紅蓋)

7

陰性對(duì)照

1.0 ml×1(綠蓋)

1.5 ml×1(綠蓋)

2.0 ml×1(綠蓋)

8

酶標(biāo)板

96T×1

96T×2

96T×5

9

蓋板膜

1

2

5

10

自封袋

1

1

2

11

說明書

1

1

1

12

稀釋板

1

2

5

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個(gè)月。

    包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血,待血液凝固后,以4000r/min 離心10分鐘,收集血清;或待血液凝固后自然析出血清,再收集血清。血清應(yīng)清亮,無溶血。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按1:1稀釋(如100μl血清加入100μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。

溫馨提示:先使用血清稀釋板稀釋完所有的待檢血清、再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到抗原包被板上,使反應(yīng)時(shí)間一致。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,28℃保存,每孔加入工作洗滌液 300μl,無需靜置,甩掉板孔中的洗滌液,重復(fù)洗滌2次,最后一次拍干。

3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl

4.混勻,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)2小時(shí)。

5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加300μl工作洗滌液,無需靜置,甩掉板孔中的洗滌液,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,同步驟5。

8.每孔加入底物顯色液100μl,置室溫( 20~25℃)避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加入終止液50μl,混勻,10分鐘內(nèi)于630nm測(cè)定各孔吸光值。 

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)0.6,陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)0.5。

【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】

1.PI(阻斷率)=(1- 陰性對(duì)照平均A值(樣本A值)×100%

2.PI≥40%為陽(yáng)性;PI<40%為陰性。

3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬血清、血漿中病毒抗體,根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。

3.若試劑盒陰陽(yáng)性對(duì)照、酶標(biāo)記物出現(xiàn)少量懸浮物,屬于正常現(xiàn)象。

4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以溶解。

6.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。

 


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