反相色譜（Reverse Phase Chromatography，RPC）是一種基于樣品成分在不同親水性條件下在固定相和流動(dòng)相之間的相互作用來實(shí)現(xiàn)分離和定量的色譜技術(shù)。它在醫(yī)藥、化工、生物等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。

原理：

RPC的固定相通常是非極性的，如C18（十八烷基）鍵合硅膠，而流動(dòng)相則是極性的，如水和有機(jī)溶劑（如甲醇、乙腈等）的混合物。樣品通過色譜柱時(shí)，根據(jù)溶質(zhì)的疏水性（即親水性）差異進(jìn)行分離。疏水性越大的溶質(zhì)在固定相上的保留時(shí)間越長，因此洗脫時(shí)間越晚；而親水性越大的溶質(zhì)在流動(dòng)相中的移動(dòng)速度越快，因此洗脫時(shí)間越早。

影響因素：

固定相：固定相的種類和鏈長會(huì)影響樣品的保留值。例如，C18固定相適用于大多數(shù)化合物，包括非極性和極性小分子。

流動(dòng)相組成：流動(dòng)相的極性越大，溶質(zhì)的分配系數(shù)越大，洗脫時(shí)間越短。通常采用降低流動(dòng)相極性（水含量）的線性梯度洗脫法。

溫度：溫度+，流動(dòng)相黏度-，流動(dòng)速度+，且流動(dòng)相與固定相之間的傳質(zhì)速度+，使分辨率增加。但溫度上升也會(huì)導(dǎo)致疏水性作用減弱，因此升高溫度時(shí)需要考慮目標(biāo)物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。

樣品的分子結(jié)構(gòu)：樣品的極性越弱，疏水性越強(qiáng)，保留值越大。

色譜柱的選擇：

色譜柱的選擇對(duì)RPC的分離效果至關(guān)重要。常用的色譜柱包括C18、C8、苯基柱等，它們適用于不同的化合物和分離需求。例如，C18色譜柱是通用型色譜柱，適用于多種化合物的分析。

應(yīng)用：

RPC在蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物堿等含有非極性基團(tuán)的各種物質(zhì)的分離中都有應(yīng)用。例如，它可以用于合成寡核苷酸的快速與高分離度分離等。