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人Sonic Hedgehog(SHH)ELISA試劑盒說明書

來源:上海西唐生物科技有限公司   2012年08月06日 13:57  

Sonic Hedgehog(SHH)ELISA試劑盒

 用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內

 

原理

本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 SHH 單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的 SHH與單抗結合,加入生物素化的抗人SHH,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合,加入底物工作液顯藍色,zui后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,SHH濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中SHH濃度。

試劑盒組成2-8保存)

酶標板(Coated Wells

96

酶標抗體工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×標本稀釋液(Sample Buffer

12ml

20×濃縮洗滌液(Wash Buffer

50ml

標準品(Standards):40ng/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

*抗體工作液(Biotinylated Antibody

12ml

終止液Stop Solution

12ml

準備試劑與收集血樣

1.          收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8保存48小時;更長時間須冷凍(-20 -70 )保存,避免反復凍融。

2.          標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液設標準管8管,*管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在*管中加入40ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。

3.          10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

檢測程序

1.          加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37120分鐘。

2.          洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置3760分鐘。

4.          洗板:同前。

5.          每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置3730分鐘。

6.          洗板:同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 暗處反應15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。

結果計算與判斷

1.          所有OD值都應減除空白值后再行計算。

2.          以標準品40002000100050025012562.50 pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。

3.          根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應SHH含量。

試劑盒性能

             1.   靈敏度zui小的SHH 檢測濃度小于30pg/ml

2.        特異性:可同時檢測重組或天然的人SHH不與人其它細胞因子有交叉反應。

3.        重復性:板內、板見變異系數均小于10%。

注意事項

             1.   以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。

 2.   洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。

             3.   板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥

             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

 

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