實驗開始注意事項：各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在 37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。 （參照說明書）

加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100μl，余孔分別加標準品或待測樣品 100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液 A工作液  100μl（在使用前一小時內配制） ，酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡 1-2分鐘，大約 400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干） 。 （參照說明書）

加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本/標準品，酶結合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在 10分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。 （參照說明書）

孵育：為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。

洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔 中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數。

試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液 A工作液、檢測溶液 B工作液請依據所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請配置標準品及工作液，盡量不要微量配置（如吸取檢測溶液 A 時，一次不要小于 10μl） ，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液 A工作液或檢測溶液 B工作液。（請參照說明書）

反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔 10 分鐘） ，如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

底物注意事項：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。
 

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少 0.3ml 注入孔內，浸泡 1-2 分鐘，根據需要，重復此過程數次。
自動洗板方法：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
 

 
以標準物的濃度為縱坐標（對數坐標） ，OD 值為橫坐標（對數坐標） ，在對數坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。  （參照說明書）
 

備注:在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。

試劑盒保存：短期（1周以內）以標簽上的標示為準，長期保存請將試劑全部保存于-20℃。

標本要求： 1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
           2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.具體操作參照說明書。

計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項:試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

注意事項:濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

注意事項:各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

注意事項:請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。（具體請參照說明書）。

試劑盒組成：（參照說明書及實物）
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（160ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個