盡管以疫苗接種為主的免疫預(yù)防，在 控制動(dòng)物病毒性傳染病中發(fā)揮了重要作用，近年來(lái)隨著集約化飼養(yǎng)業(yè)的興起和養(yǎng)殖 條件的改變，一些古老的傳染病重新流行，同時(shí)也發(fā)生了一些新的病毒性傳染?。荒承┎《?存在抗原漂移現(xiàn)象，并出現(xiàn)了一些*毒株； 在新生動(dòng)物，母源抗體干擾疫苗效果的現(xiàn)象 較 為嚴(yán)重；弱毒疫苗還有毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)。因此，人們正在探索新的防疫途徑，篩選和培育抗 病 的動(dòng)物品系，是其重要的一個(gè)研究領(lǐng)域。1982年P(guān)almiter等通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將大鼠生長(zhǎng)激 素基因轉(zhuǎn)移到小鼠的染色體內(nèi)，不僅使該基因獲得表達(dá)并可遺傳給子代，且其表達(dá)產(chǎn)物呈現(xiàn) 明顯的促生長(zhǎng)效應(yīng)，培育得到世界上*例“超級(jí)小鼠”。這一技術(shù)為進(jìn)行動(dòng)物的育種研究 開(kāi)辟了一條新途徑。同時(shí)，人們利用基因工程的原理和技術(shù)不僅分離或合成了諸如IFN、 白介素等一類具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等作用的細(xì)胞因子的DNA或cDNA，還發(fā) 現(xiàn)了具有終止病毒基因轉(zhuǎn)錄和翻譯的反義RNA、Ribozyme等一類小分子RNA。這些DNA、c DNA或RNA的表達(dá)質(zhì)粒不僅可以插入細(xì)胞染色體DNA內(nèi)和進(jìn)行表達(dá)，而且可使轉(zhuǎn)化細(xì)胞獲得抗 病毒等功能。因而國(guó)內(nèi)外學(xué)者在80年代初期相繼提出了基因工程抗病育種的設(shè)想，并進(jìn)行了 深入的探索研究。Chen等（1988年）將mMT1與人IFNβ1的融合基因?qū)胄∈笊诚蹬?育獲得了轉(zhuǎn) 基因小鼠，小鼠血清中含有人IFNβ１，　并可以在體外保護(hù)WISH細(xì)胞免受水泡性口炎 病毒的感染。 以850PFU的偽狂犬病病毒接種小鼠腳墊，6天后，非轉(zhuǎn)基因個(gè)體全部死亡，而轉(zhuǎn)基因個(gè)體（A7 5）在 接種后9天只有1只死亡。另一株（B9）轉(zhuǎn)基因小鼠，25%的個(gè)體在接毒后幾個(gè)月內(nèi)均保持健康 ，并繁殖了6代，建立了轉(zhuǎn)基因鼠克隆系。國(guó)內(nèi)外其他研究人員也在小鼠和家兔開(kāi)展了類似 的 研究工作，并獲得較為滿意的結(jié)果。Lindenmann等（1964年）發(fā)現(xiàn)具有染色體顯性Mx等位基 因的小鼠對(duì)A型及B型流感病毒具有天然的抵抗力, 后來(lái)發(fā)現(xiàn)Mx基因存在于幾 乎所有的真核生物中，只是以隱性等位基因的形式存在，小鼠的這個(gè)基因（Mx1）位于其16號(hào) 染色體上，在IFN、雙鏈RNA及病毒的誘導(dǎo)下可以表達(dá)。Aebi等（1989年）證實(shí)，在培養(yǎng)細(xì)胞 內(nèi)Mx1蛋 白與流感病毒復(fù)制的抑制作用密切相關(guān)。Parlovic等（1990年）發(fā)現(xiàn)人的MxA及大鼠的Mx1蛋白 在細(xì)胞 上不僅具有抗流感病毒的作用，而且還抑制水泡性口炎病毒的復(fù)制。Garber利用小鼠Mx1蛋 白的全長(zhǎng)cDNA轉(zhuǎn)染雞胚成纖維細(xì)胞，轉(zhuǎn)化細(xì)胞對(duì)雞的流感病毒A/Turkey/Wisconsin/68和A/ Turkey/Massachussetts/65均具有抑制其復(fù)制的作用。Arnheiter等（1990年）將含有該基因 啟動(dòng)子的 全長(zhǎng)cDNA導(dǎo)入小鼠受精卵內(nèi)，培育得到轉(zhuǎn)基因小鼠，其中979系小鼠為高反應(yīng)系，無(wú)論感染 的流感病毒劑量大小，抗感染效率均在63～69%之間。無(wú)反應(yīng)系（1009）和同窩非轉(zhuǎn)基因個(gè)體 一樣，均在攻毒后死亡。964系為低反應(yīng)系，轉(zhuǎn)基因鼠用高劑量（50 000LD50）流感病毒攻擊 時(shí)無(wú)一死亡，而在以低劑量（5～50LD50）攻毒時(shí)則不能存活，但在同時(shí)注射IFN和小劑量 病毒時(shí)又可避免死亡。這說(shuō)明Mx蛋白表達(dá)的水平受病毒劑量或IFN水平的誘導(dǎo)，并直接影 響其 對(duì)病毒的抗感染能力。因而在進(jìn)行攻毒前必須使Mx1蛋白達(dá)到保護(hù)水平。據(jù)報(bào)道，利用該基 因 培育的抗流感病毒轉(zhuǎn)基因豬也已取得成功。但有關(guān)Mx1蛋白抗病毒的具體機(jī)制尚待闡明。 反義RNAzui初發(fā)現(xiàn)于原核生物，它們以自然存在的方式，通過(guò)堿基配對(duì)，特異性地與mRNA 結(jié)合，阻止mRNA的翻譯，是存在于原核生物中的一種基因表達(dá)調(diào)控因子。在真核細(xì)胞中也發(fā) 現(xiàn)了一些這樣的RNA小分子，并通過(guò)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)證實(shí)了反義RNA在真核細(xì)胞內(nèi)抑制或關(guān)閉mR NA翻譯的功能。它們通過(guò)與mRNA結(jié)合，形成二聚體，破壞mRNA的正常翻譯過(guò)程。反義核酸 抑制病毒復(fù)制的試驗(yàn)不僅已在培養(yǎng)細(xì)胞上獲得巨大成功，在動(dòng)物體內(nèi)也實(shí)現(xiàn)了某些病毒的反 義抑制。Han等（1991年）將Moloney鼠白血病病毒（MMuLV）的前病毒包裝序列（ψ）反向插入M MuLV LTR的 嗜淋巴細(xì)胞啟動(dòng)子/調(diào)節(jié)因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)下游或合胞病毒的極早區(qū)（immediate early regi on）內(nèi)，將在NIH3T3細(xì)胞上具有阻止病毒RNA包裝進(jìn)衣殼的反義表達(dá)序列導(dǎo)入小鼠受精卵 ， 在小鼠出生當(dāng)日進(jìn)行MMuLV攻毒后無(wú)一發(fā)生白血病，而對(duì)照的正常鼠有31%患病。Ernst等（ 1991年）利用 人5型腺病毒（Ad5）的反義表達(dá)質(zhì)粒成功地建立了轉(zhuǎn)基因兔。通過(guò)轉(zhuǎn)基因兔的腎原代細(xì)胞 培 養(yǎng)物滴定抗腺病毒活性，5只被測(cè)轉(zhuǎn)基因兔中有2只顯示明顯的Ad5抗性。農(nóng)牧大學(xué)基因工程 實(shí)驗(yàn)室亦在 應(yīng)用反義抑制技術(shù)進(jìn)行抗豬瘟病毒育種的研究。利用化學(xué)合成及反轉(zhuǎn)錄合成的豬瘟病毒的反 義cDNA轉(zhuǎn)化PK15細(xì)胞，已經(jīng)篩選獲得抗豬瘟病毒的細(xì)胞系。可見(jiàn)，應(yīng)用反義RNA進(jìn)行抗病 育 種研究，是一個(gè)很有價(jià)值的探索領(lǐng)域。Ribozyme是一種天然的RNA小分子，有人譯稱核酶 。這種RNA小分子 具有催化RNA切割反應(yīng)的功能，可以序列特異性地切割RNA。研究表明，Ribozyme主要包括三 部分結(jié)構(gòu)，一是與識(shí)別底物RNA上GUX（X=C、A）并與之互補(bǔ)結(jié)合的A部分；二是由13個(gè)核苷酸 組成的序列高度保守的形成螺旋型二級(jí)結(jié)構(gòu)的B部分，其螺旋部后3對(duì)堿基可以改變，末端RN A環(huán)可以斷開(kāi)，因此可以將Ribozyme分成左右兩半進(jìn)行設(shè)計(jì)；三是B部分兩側(cè)與靶RNA序列互 補(bǔ)的C部分，它能使Ribozyme與底物發(fā)生特異性結(jié)合，使反應(yīng)基因定位，其序列由底物R NA的核苷酸序列決定。由此看來(lái)，A、C兩部分的鹼基互補(bǔ)區(qū)決定了Ribozyme切割反應(yīng)的特異 性 ；B部分為Ribozyme的活性部位，決定了Ribozyme的切割活性。因此，只要已知某種病毒的R NA序列，就可以設(shè)計(jì)并合成相應(yīng)的抗病毒Ribozyme, 并利用上述方法進(jìn)行轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育 。以其它抗病毒相關(guān)基因開(kāi)展轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育研究也相應(yīng)取得了一定的進(jìn)展。但是抗病 毒 感染育種是一個(gè)浩大的生物工程，就目前技術(shù)而言，培育一個(gè)新的抗某一特異性病毒感染的 個(gè)體并不十分困難，但是，培育一個(gè)具有穩(wěn)定的優(yōu)良生物學(xué)性狀，同時(shí)又不影響該群體的其 它生物學(xué)性狀的群體還需要經(jīng)過(guò)數(shù)年甚至數(shù)十年的努力。