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人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

來源:上海信則生物科技有限公司   2014年01月07日 09:51  

人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:                                                          96T

2pg/ml-48pg/ml

 

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中早期分泌抗原靶6(ESAT-6)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)水平。用純化的人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入早期分泌抗原靶6(ESAT-6),再與HRP標記的早期分泌抗原靶6(ESAT-6)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的早期分泌抗原靶6(ESAT-6)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人早期分泌抗原靶6(ESAT-6)濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1瓶

7

終止液

6ml×1瓶

2

酶標試劑

6ml×1瓶

8

標準品(96pg/ml)

0.5ml×1瓶

3

酶標包被板

12孔×8條

9

標準品稀釋液

1.5ml×1瓶

4

樣品稀釋液

6ml×1瓶

10

說明書

1份

5

顯色劑A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2張

6

顯色劑B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

48pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

24pg/ml

4號標準品

150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

12pg/ml

3號標準品

150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

6pg/ml

2號標準品

150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

3pg/ml

1號標準品

150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結:

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒 
小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒
小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒
小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒 
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小鼠16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)ELISA試劑盒
小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒
小鼠內皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒
小鼠膽固醇酯轉移蛋白(CETP)ELISA試劑盒
小鼠促黃體激素(LH)ELISA試劑盒
小鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒
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小鼠絨毛膜促性腺激素(CG)ELISA試劑盒
小鼠丙二醛(MDA)ELISA試劑盒
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒
小鼠C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒 
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小鼠甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒
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小鼠補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒
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小鼠雌三醇(E3)ELISA試劑盒
小鼠雄烯二酮(ASD)ELISA試劑盒
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小鼠睪酮(T)ELISA試劑盒
小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒 
小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒
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小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒
小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒
小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒
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小鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒
小鼠白介素1β (IL-1β)ELISA試劑盒
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小鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒
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大鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒
大鼠血小板生成素(TPO)ELISA試劑盒
大鼠可溶性凋亡相關因子(sFAS/Apo-1)ELISA試劑盒
大鼠Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISA試劑盒
大鼠甘露糖結合蛋白/甘露糖結合凝集素(MBP/MBL)ELISA試劑盒 
大鼠白介素7(IL-7)ELISA試劑盒
大鼠絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶(STK)ELISA試劑盒

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