目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>抗氧系列>> BC4060-50T/48S酪*酸解氨酶(TAL)活性檢測試劑盒 抗氧化
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/48S |
貨號 | BC4060 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
主要用途 | 酪*酸酶活性檢測 |
酪*酸解氨酶(TAL)活性檢測試劑盒說
明書
紫外分光光度法
貨號:BC4060
規格:50T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑二:臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水和20 μL濃鹽酸(37%)充分溶解待用。現配現用。2-8℃保存4周。
產品說明:
酪*酸解氨酶(TAL)廣泛存在于植物和微生物中,是苯丙*酸次生代謝途徑的關鍵酶之一。TAL能夠躍過肉桂酸-4-羥基化酶(C4H)直接將酪*酸轉化為香豆酸,香豆酸可進一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素類天然產物。
TAL能夠分解酪*酸產生香豆酸,其在310nm下有吸收峰,根據吸光度的變化率可計算出TAL活性。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、細胞超聲破碎儀、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰、濃鹽酸(37%)和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。12000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、細胞或細菌:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200w,超聲3s,間隔10s,重復30次)。12000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
二、測定步驟
紫外分光光度計預熱30min以上,波長調至310nm,蒸餾水調零。
加樣表(在1mL石英比色皿中分別加入)
試劑名稱(μL) | 測定管 |
試劑一 | 700 |
試劑二 | 200 |
樣本 | 100 |
將上述試劑分別加入比色皿后迅速吹打混勻,記錄第10s的吸光值A1,迅速置于37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)水浴或培養箱中3min,拿出迅速擦干測定3min10s時的吸光值A2,計算ΔA =A2 -A1。
三、TAL酶活計算
1、按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.01定義為一個酶活性單位。
TAL(U/mg prot)=ΔA÷0.01×V反總÷(V樣×Cpr)÷T=333×ΔA÷Cpr
2、按樣本質量計算:
單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.01定義為一個酶活性單位。
TAL(U/g 質量)=ΔA÷0.01×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=333×ΔA÷W
3、按細胞或細菌數量計算:
單位的定義:每104個細胞或細菌在反應體系中每分鐘在310nm下吸光度變化0.01定義為一個酶活性單位
TAL(U/104 cell)=ΔA÷0.01×V反總÷(500÷V提取×V樣)÷T=0.667×ΔA
V反總:反應總體積,1mL;V樣:加入的樣本體積,0.1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;V提取:提取液體積,1mL;500:500萬個細胞;T:反應時間,3min。
注意事項:
當ΔA大于0.2或者A1大于1.5時,建議將樣本用蒸餾水稀釋后測量;ΔA過小時,建議增加酶促反應時間(5min或10min)或增加加入的樣本體積來測定。計算時注意同步修改計算公式。(計算時注意同步修改計算公式)
實驗實例:
取0.1g稗草葉加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清稀釋3倍后按照測定步驟操作,測得計算ΔA=A2-A1=0.253-0.243=0.01,按樣本質量計算酶活得:
TAL(U/g 質量)=333×ΔA÷W×F(稀釋倍數)=333×0.01÷0.1×3=99.9 U/g 質量。
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