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蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC1270
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：使用前根據(jù)樣本數(shù)，每支加2mL水震蕩溶解后離心取上清使用，每支為10個樣本用量，溶液變黑后即不可再繼續(xù)使用；

2. 試劑五：自備乙酸乙酯和無水乙醇，根據(jù)測定樣本量，將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。（提供1個125mL空瓶）

產(chǎn)品說明：
蛋白質(zhì)羰基化是指氨基酸殘基側(cè)鏈中的氨基或亞氨基受到氧自由基攻擊最后轉(zhuǎn)變成醛基，并釋放NH₃⁺的過程.其在體內(nèi)的形成主要是通過金屬離子催化氧化系統(tǒng)完成。蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標(biāo)志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。
羰基與2,4-*二*腙，在370nm處有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、低溫離心機(jī)、超聲細(xì)胞破碎儀、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水、無水乙醇和乙酸乙酯。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：
1. 試劑一使用之前根據(jù)要測定的樣本數(shù)現(xiàn)配，配置好后4℃保存，若變?yōu)楹谏瑒t不能使用。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

取0.2g小鼠心臟加入2mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.2mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測定步驟操作，測得A_370測定管=1.269，A_370對照管=1.048，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g質(zhì)量）=（A_370測定管-A_370對照管）÷8÷W=0.1381 μmol/g質(zhì)量。
取0.2g國槐葉片加入2mL提取液充分勻漿后于4℃，5000rpm離心10min，取上清，加入0.2mL試劑一，室溫放置10min，4℃，12000rpm離心10min，取上清，按照測定步驟操作，測得A_370測定管=0.137，A_370對照管=0.012，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g質(zhì)量）=（A_370測定管-A_370對照管）÷8÷W=0.0781 μmol/g質(zhì)量。
取胎牛血清樣本按照說明步驟操作，直接測定，測得A_370測定管=0.578，A_370對照管=0.278，按液體體積計算酶活得：
蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mL）=（A_370測定管-A_370對照管）÷17.6=0.0170 μmol/mL。
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