目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-常量法>>抗氧系列>> BC5890-50T/24S蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測(cè)試劑盒 抗氧
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更新時(shí)間:2024-04-15 11:10:42瀏覽次數(shù):535評(píng)價(jià)
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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/24S |
貨號(hào) | BC5890 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測(cè) |
蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào):BC5890
規(guī)格:50T/24S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體17 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體2 mL×1支 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 提取液配制:臨用前根據(jù)樣本量按照提取液一:提取液二=1mL:1 mL進(jìn)行配制,請(qǐng)勿一次性全部混合。
2、 若試劑二有析出,可置于37℃水浴加熱至澄清透明后使用。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg還原型谷*甘肽(GSH)。臨用前加入1.3mL蒸餾水配制成25μmol/mL,2-8℃保存4周。
4、 0.125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品配制:取50μL 25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品,加入950μL蒸餾水,充分混勻,配制成1.25μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品;然后取100μL 1.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品,加入900μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.125μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說(shuō)明:
巰基的存在使得蛋白質(zhì)能夠進(jìn)行二硫鍵的形成,從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性。此外,巰基還參與到氧化還原反應(yīng)中,具有重要的生物學(xué)作用。在細(xì)胞內(nèi),巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān),因此巰基也成為了生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要研究對(duì)象。本試劑盒測(cè)定的是蛋白質(zhì)中的游離巰基含量。
一定條件下巰基會(huì)發(fā)生親核反應(yīng),即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸(DTNB)反應(yīng),生成黃色化合物,在412nm處有最大吸收峰,據(jù)此可以計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量。
-SH +DTNB TNB(412nm)
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、丙酮(AR)、蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,3000rpm 離心10min,棄上清。在沉淀中加入2mL試劑一,攪勻后溶解沉淀,沉淀溶解液作為樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(注:(1)植物葉片等纖維含量較高的樣本,溶解沉淀后4℃ 3000rpm離心3min,取上清作為樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn),;(2)加入試劑一后會(huì)有大量氣泡產(chǎn)生,請(qǐng)緩慢加入,建議使用5mL的EP管)。
2. 細(xì)菌/細(xì)胞:按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(106個(gè)):提取液體積(mL)為5~10:1的比例(建議5百萬(wàn)細(xì)菌/細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3秒,間隔10秒,總時(shí)間3min)后,于4℃,3000rpm 離心10min,棄上清。在沉淀中加入2mL試劑一,攪勻后溶解沉淀,沉淀溶解液作為樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(注:(1)若沉淀溶解不全,可4℃ 3000rpm離心3min,取上清作為樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn);(2)加入試劑一后會(huì)有大量氣泡產(chǎn)生,請(qǐng)緩慢加入,建議使用5mL的EP管)。
3. 血清/血漿、牛奶等液體:取100μL液體樣本加入0.9mL丙酮,4℃,3000rpm 離心10min,棄上清。在沉淀中加入2mL試劑一,攪勻后溶解沉淀,沉淀溶解液作為樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(注:若測(cè)定數(shù)值偏小,可改變樣本與丙酮的比例,如取0.2mL液體樣本加入0.8mL丙酮或0.3mL液體樣本加入0.7mL丙酮,注意同步修改計(jì)算公式)。
二、測(cè)定步驟
1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表:(建議在5mL的EP管中操作)
試劑名稱(mL) | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | |
樣本 | 0.5 | 0.5 | - | - | |
蒸餾水 | - | - | 0.5 | - | |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | - | 0.5 | |
提取液 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | |
請(qǐng)緩慢加入提取液混勻,并用吸頭反復(fù)吹打至氣泡不再產(chǎn)生(期間會(huì)有大量氣泡產(chǎn)生,開(kāi)蓋放置) | - | - | |||
試劑二 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | 0.3 | |
充分混勻,4℃ 3000 rpm離心10min后取上清于1.5mL EP管中 | - | - | |||
上清液 | 0.7 | 0.7 | 0.7 | 0.7 | |
試劑三 | 0.3 | 0.25 | 0.25 | 0.25 | |
試劑四 | - | 0.05 | 0.05 | 0.05 | |
充分混勻,室溫靜置10min后,測(cè)定412nm下的吸光度分別記為A對(duì)照、A測(cè)定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1-2次。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
三、蛋白質(zhì)游離巰基含量的計(jì)算
1. 按照樣本蛋白濃度計(jì)算
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/mg prot)=ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V樣本÷(V樣本×Cpr)×F
=0.125× ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×Cpr×F
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g 質(zhì)量)=ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V試劑一÷W×F
=0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F
3. 按照液體體積計(jì)算
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/mL)=ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V試劑一÷V液樣×F
=2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F
4. 按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計(jì)算:
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/106 cell)= ΔA測(cè)定÷(ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V試劑一÷N×F
= 0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N×F
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.125μmol/mL;V樣本:加入的樣本體積,0.5mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;V試劑一:提取時(shí)加入試劑一體積,2mL;V液樣:提取時(shí)加入的樣本體積,0.1mL;F:稀釋倍數(shù)。N:細(xì)胞/細(xì)菌總數(shù),以106計(jì)。
注意事項(xiàng):
1. 若樣本ΔA測(cè)定<0.01,可適當(dāng)增大樣本量后測(cè)定,注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計(jì)算公式;若樣本ΔA測(cè)定>1.5,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測(cè)定,注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
2. 可使用BCA法測(cè)定蛋白濃度。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1、 取100μL馬血清,按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.110-0.021=0.089,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557,按樣本液體體積計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量得:
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/mL)=2.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F =0.399μmol/mL。
2、 取0.1036g鼠肝,按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.339-0.095=0.244,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557,按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量得:
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =1.057μmol/g 質(zhì)量。
3、 取0.1078g黃豆粉,沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后,按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.108-0.033=0.075,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557,按樣本質(zhì)量計(jì)算蛋白質(zhì)游離巰基含量得:
蛋白質(zhì)游離巰基含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.25×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =0.625μmol/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC1370/BC1375 總巰基含量檢測(cè)試劑盒
BC1430/BC1435 非蛋白巰基含量檢測(cè)試劑盒
BC5800/BC5805 蛋白質(zhì)總巰基含量檢測(cè)試劑盒
BC5790/BC5795 蛋白質(zhì)二硫鍵含量檢測(cè)試劑盒
蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測(cè)試劑盒 抗氧 蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測(cè)試劑盒 抗氧
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