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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>抗氧系列>> BC4435-100T/48S尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化

尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化
  • 尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC4435-100T/48S
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-16 16:27:38瀏覽次數:1145評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現貨 規格 100T/48S
貨號 BC4435 應用領域 環保,化工,生物產業,農業,綜合
主要用途 尿酸酶活性檢測
儲存條件
-20℃
中文名稱
尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化
有效期
6個月
單位

英文名稱
Uricase Activity Assay Kit
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規格
100T/48S

尿酸酶活性檢測試劑盒說明書

微量法

注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號BC4435

規格100T/48S

產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規格

保存條件

提取液

液體60 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體5 mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體4 mL×1

-20℃保存

試劑三

液體10 mL×1

2-8℃保存

試劑

液體6 mL×1

2-8℃保存

標準品

液體102 μL×1

2-8℃保存

溶液的配制: 

1、 標準品:臨用前加入898 µL蒸餾水得到1 mmol/mL的過氧*溶液,2-8℃保存4周。

2、 工作液A的配制:按照試劑二:試劑三:試劑四 = 0.85mL2.55mL1.7mL5.1mL30S)的比例配制,用于樣本測定管、空白管及標準管的檢測根據樣本量現配現用,配后建議2小時內用完2-8℃或者冰上保存)

3、 工作液B的配制:按照試劑二:試劑三:試劑一 = 0.85mL2.55mL1.7mL5.1mL30S)的比例配制,用于樣本對照管的檢測根據樣本量現配現用,配后建議2小時內用完2-8℃或者冰上保存)

產品說明:

尿酸酶,又名尿酸*化酶,是一種參與嘌呤降解途徑的氧化酶,可以將尿酸分解為尿囊酸素進而排出體外。尿酸為嘌呤代謝的終末產物,積累過多將導致痛風、腎病、心血管疾病等多種疾病的發生。尿酸酶在尿酸相關疾病的臨床檢測以及治療中有著重要意義。

尿酸酶催化尿酸分解為尿*素、CO2H2O2H2O2氧化亞鐵*中的Fe2+生成Fe3+Fe3+進一步與4-氨基安*比林和酚反應生成紅色醌類化合物,在505 nm處有特征吸收峰,通過測定505 nm處的吸光值來反映尿酸酶的活性。 

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰、EP管、蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

組織:按照組織質量(g)︰提取液體積mL15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000 rpm4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。

細菌或細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個): 提取液體積(mL)為500~1000 : 1的比例(建議500萬個細菌或細胞加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細菌或細胞(功率200 W,超聲3 s,間隔7 s,總時間5 min);然后10000 rpm4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。

二、測定步驟

1、 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上,調節波長至505 nm,分光光度計蒸餾水調零。

2、 1 mmol/mL 標準液用蒸餾水稀釋為0.5 µmol/mL的標準溶液備用。標準溶液的稀釋:取20μL 1mmol/mL過氧化氫標準液,加入1980μL蒸餾水,充分混勻,配制成10μmol/mL標準液,再取50μL 10μmol/mL過氧化氫標準液,加入950μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.5μmol/mL標準液使用,現用現配。(實驗中每管需要30μL,為減小實驗誤差,故配制大體積)

3、 操作表:(1.5 mL離心管/96孔板中)

試劑名稱(µL

對照管

測定管

標準管

空白管

樣本

30

30

-

-

標準溶液

-

-

30

-

蒸餾水

-

-

-

30

工作液A

-

170

170

170

工作液B

170

-

-

-

混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)恒溫培養箱中準確反應30 min。于微量玻璃比色皿/96孔板,測定505nm處吸光值A,分別記為A對照管、A測定管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管,標準管和空白管只需測1-2次。

三、尿酸酶活性計算

1)按樣本質量計算

酶活定義:在pH 8.8的條件下,每克樣本每小時分解尿酸產生 1 μmol H2O2定義為一個酶活力單位。

尿酸酶酶活(U/g 質量)= ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V樣本÷W×V樣本÷V提取)÷T

= ΔA測定÷ΔA標準÷W

2)按蛋白濃度計算

酶活定義:在pH 8.8的條件下,每毫克蛋白每小時分解尿酸產生 1 μmol H2O2定義為一個酶活力單位。

尿酸酶酶活(U/mg prot= ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V樣本÷Cpr×V樣本)÷T

= ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

(3)按照細菌數量或細胞計算

酶活定義:在pH8.8的條件下,每104個細菌或細胞每小時分解尿酸產生 1 μmol H2O2定義為一個酶活力單位。

尿酸酶酶活(U/104 cell= ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V樣本÷N×V樣本÷V提取)÷T

=ΔA測定÷ΔA標準÷N

C標準:標準溶液濃度,0.5 µmol/mLV樣本:加入的樣本體積,0.03 mLV提取:提取液體積,1 mLT:酶促反應時間:0.5 hCpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質量,gN細菌數量(以萬計)

注意事項:

1、 A大于1.5時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定,并在計算時乘以相應的稀釋倍數。

2、 工作液A與工作液B,需根據樣本量現配現用,配后建議2小時內用完。工作液本身淡黃的,隨著時間的延長,會變為紅色,如有變色,則視為失效,需重新配制

實驗實例:

1、 0.1g小鼠肝臟進行樣本處理,取上清稀釋4倍后按測定步驟操作,使用96孔板測定計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.804-0.285=0.519ΔA標準=A標準管-A空白管=0.741-0.051=0.690,按樣本質量計算酶活得:

尿酸酶酶活(U/g 質量)=ΔA÷ΔA標準÷W×4(稀釋倍數)= 0.519÷0.690÷0.1×4(稀釋倍數)=30.09 U/g 質量。

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