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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>酯酶系列>> BC5450-50T/24S抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶

抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶
  • 抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC5450-50T/24S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-19 14:51:47瀏覽次數(shù):625評價

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分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/24S
貨號 BC5450 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測
抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶
儲存條件
-20℃
有效期
6個月
單位

英文名稱
Fluoride Resistant Acid Phosphatase Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

抗氟離子酸性磷酸酶(FRAP)活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號:BC5450

規(guī)格:50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體30 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體4mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體3.6mL×1

2-8℃保存

試劑三

粉劑×1

-20℃保存

試劑四

粉劑×1

2-8℃保存

試劑五

液體0.5mL×1

2-8℃保存

試劑六

液體3.5mL×1

2-8℃保存

試劑七

液體3.5mL×1

2-8℃保存

試劑八

液體40mL×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

液體1mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑三:臨用前加入3.5mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑-20℃保存可以保存4周,避免反復(fù)凍融。

2、 試劑四:臨用前加入5.5mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑2-8℃保存可以保存4

3、 試劑五:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑五:蒸餾水=1:9的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。

4、 標(biāo)準(zhǔn)品:5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前取100μL5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液EP管中,加入700μL蒸餾水充分混合,配0.625 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液

產(chǎn)品說明:

抗氟離子酸性磷酸酶(fluoride resistant acid phosphatase, FRAP)是酸性磷酸酶的一種。抗氟離子酸性磷酸酶主要分布于在絕大多數(shù)細(xì)胞的溶酶體中、前列腺(prostate gland)、腦、肝臟、脾臟和血小板。

抗氟離子酸性磷酸酶的活性不被氟離子抑制,而其他的酸性磷酸酶的活性則會受到氟離子的抑制。酸性條件下,抗氟離子酸性磷酸酶催化PN PP生成對硝基 苯*。對硝基 苯*在堿性條件下呈黃色,可以在400nm波長下檢測吸光度。產(chǎn)物黃色越深,說明抗氟離子酸性磷酸酶活性越高,反之則酶活性越低。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿研缽/勻漿器/超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

操作步驟:

一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

 

1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3、液體:直接測定。(若溶液呈現(xiàn)渾濁,則離心取上清后再測定)

二、測定步驟

1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,用蒸餾水調(diào)零。

2、操作表:

試劑名稱(μL

測定管

對照管

標(biāo)準(zhǔn)管

標(biāo)準(zhǔn)空白管

樣本

50

50

-

-

標(biāo)準(zhǔn)品

-

-

50

-

蒸餾水

-

50

-

50

試劑一

50

50

50

50

試劑二

50

50

50

50

試劑三

50

-

50

50

試劑四

50

50

50

50

試劑五

50

50

50

50

試劑六

50

50

50

50

試劑七

50

50

50

50


37℃避光反應(yīng)30min

-

-

試劑八

600

600

600

600

混勻后測定在400nm處的吸光度,記作A測定A對照A標(biāo)準(zhǔn)A標(biāo)準(zhǔn)空白?A測定=A測定-A對照?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。(標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)準(zhǔn)空白管只需做1-2次。)

三、FRAP活性計算

(1) 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個酶活力單位。

FRAP活性(U/mg prot=(?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷Cpr×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

(2) 按樣本質(zhì)量計算

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個酶活力單位。

FRAP活性(U/g 質(zhì)量)= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷W÷V樣總×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)目計算

單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol義為一個酶活力單位。

FRAP活性(U/104 cell= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷N÷V樣總×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

(4) 按血清(漿)等液體體積計算

單位的定義:每mL血清(漿)等液體每分鐘催化產(chǎn)生1nmol義為一個酶活力單位。

FRAP活性(U/mL= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

 

C標(biāo)準(zhǔn)酚標(biāo)準(zhǔn)液0.625 μmol/mLV:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.05mLV樣總:加入的提取液體積,1mLT:反應(yīng)時間,30minCpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,gN:細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)目,以萬計 103:單位換算系數(shù),1μmol/mL=103nmol/mLF:樣本稀釋倍數(shù)。

注意事項:

1、 如果測定吸光值或?A測定大于1.2,可以對樣本進(jìn)行稀釋或者縮短37℃酶促反應(yīng)時間;測定吸光值或?A測定小于0.01,可以加大樣本量或者延長37℃酶促反應(yīng)時間。最終計算時同步修改計算公式。

實驗實例:

1、 稱取0.1074g兔子肝臟組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,將上清液稀釋2倍后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.685-0.018=0.667?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.582-0.031=0.551 帶入公式計算:

FRAP活性(U/g 質(zhì)量)= 20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =469.558 U/g 質(zhì)量

2、 稱取0.1057g竹子葉,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?測定=A測定-A對照=0.445-0.148=0.297?標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.582-0.031=0.551帶入公式計算:

FRAP活性(U/g 質(zhì)量)= 20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =106.223U/g 質(zhì)量

3、 吸取0.05mL羊血清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?測定=A測定-A對照=0.084-0.028=0.056?標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.582-0.031=0.551帶入公式計算: 

FRAP活性(U/mL= 20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F =2.117 U/mL 

參考文獻(xiàn):

[1] Megat R, Wahab A, Dasor M M , et al. Crevicular tartrate resistant acid phosphatase activity and rate of tooth movement under different continuous force applications[J]. African journal of pharmacy and pharmacology, 2011, 5(20):2213-2219. 

[2] Natasˇa Mitic′, Mohsen Valizadeh, Eleanor W.W. Leung, et al. Human tartrate-resistant acid phosphatase becomes

an effective ATPase upon proteolytic activation [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics 439 (2005) 154–164.

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC2140/BC2145 組織及血液堿性磷酸酶AKP/ALP活性檢測試劑盒

BC2130/BC2135 組織及血液酸性磷酸酶ACP活性檢測試劑盒

BC5400/BC5405 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性檢測試劑盒

 

抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶 抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶

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