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ELISAS實驗抗原的攝取
(1) 抗原的攝取 任何血清學試驗都依賴于具有價、特異性強的抗血清的產生,而抗血清的制備離不開抗原的收集、保存和提取。采回的害蟲饑餓24h后,將等體積的磷酸緩沖液(PBS)滴入備用的害蟲中,研磨后加入過量的PBS(PH=7.4),在4℃下攪拌24h,然后以4000-5000r/min的速度離心20h,分離上清液。沉渣用上法重復抽提一次。
將兩次所得的上清液混合后,置于4℃下更換多次冷鹽水透析24h或48h。透析液用冰凍干燥法或反透析法進行濃縮。濃縮液用紫外分光光度計測定蛋白質含量,得到適當濃度的蛋白質溶液即位抗原。
抽提過程中應注意:①所有的處理都需在低溫(4℃)下進行,以防蛋白質變性:②若抗原溶液需保存較長的時間,則需加防腐劑(如NaN3)或在凍干狀態下保存:③為制備特異性強的抗血清,抗原可用標準的生化技術進行純化:④如一次不能收集足夠的抗原,可將每次的蟲體保存在-20℃或將抗原凍干直到積累足夠的量。
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