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如何解決色譜柱使用過程出現(xiàn)的問題

閱讀:3218      發(fā)布時間:2014-12-29
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 問題:                                      
不同色譜柱間差異  
使用期間柱變化  
原因:    
填料、鍵合相不同  
柱床破壞  
鍵合相丟失  
硅膠基質(zhì)溶解  
強(qiáng)保留組分堆積堵塞  
表現(xiàn):  
保留因子(k),分離因子(α)  
柱效(N)  
保留因子(k),分離因子(α)  
柱效(N)  
保留因子(k),柱效(N)  
問題:   
柱外效應(yīng)  
原因:  
系統(tǒng)差異、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。   
表現(xiàn):  
柱效(N)  
問題:  
分離效果變差   
原因:  
流動相組分改變  
流速改變  
溫度改變  
表現(xiàn):  
保留因子(k),柱效變化很小  
保留因子(k),分離因子(α)  
保留因子(k),柱效變化很小  
問題:  
柱平衡慢  
原因:  
重新平衡時間不夠   
柱超載 樣品量太大   
表現(xiàn):  
保留因子(k),柱效變化很小  
保留因子(k),柱效(N)  
造成色譜峰( 不對稱)拖尾的原因  
1.色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷;  
2.柱頭有污染;  
3.樣品超載;  
4.樣品溶劑不合適;  
5.柱外效應(yīng);  
6.化學(xué)或二次保留(硅羥基)效應(yīng);  
7. 緩沖容量不足或不合適;  
8. 重金屬污染。  
如何解決峰形拖尾的問題  
A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題  
1.流動相中,加入30mM的三乙胺(用于堿性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物), 未知化合物加醋酸三乙胺;  
2.如仍然拖尾,將三乙胺換為二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);  
3.降低進(jìn)樣量至<1μg。  
B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問題  
1.如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚,反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇,加1%氫氧化銨混合液沖洗;正向柱可用甲醇沖洗;  
2.使用保護(hù)柱。  
C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬  
1.進(jìn)樣體積過大,(通常≤25μL);  
2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大(*連接管應(yīng)<20cm,內(nèi)徑為0.007");  
3.檢測器流通池的體積過大。

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