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黃曲霉素試劑盒詳細(xì)說(shuō)明

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所在地上海市

更新時(shí)間:2018-05-18 11:25:01瀏覽次數(shù):2280次

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黃曲霉素(AFT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA

              試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

 

 

本試劑盒僅供研究使用。 

 聲明:應(yīng)國(guó)家相關(guān)部門(mén)關(guān)于違禁字的規(guī)定本文中黃曲霉中的毒以堵替代

 

1 使用目的:

 

本試劑盒用于飼料、魚(yú)、蝦和肉類(lèi)組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中總黃曲霉堵素(AFT)殘留的定量檢測(cè)。

 

2 實(shí)驗(yàn)原理

 

本試劑盒采用直接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法,在微孔板包被有黃曲霉素偶聯(lián)抗原,加入黃曲霉(AFT)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離黃曲霉(AFT)與微孔條上預(yù)包被的黃曲霉(AFT)偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗黃曲霉(AFT)抗體酶標(biāo)記物,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中黃曲霉(AFT)含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中黃曲霉(AFT)的含量。

 

3 試劑盒組成

 

  • 預(yù)包被的 AFT 偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1 塊(12 孔×4 條)。

 

  • AFT 標(biāo)準(zhǔn)品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ng/ml0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7ng/ml,8.1 ng/ml

AFT 抗體酶結(jié)合物:1 瓶(3ml)。

顯色液 A1 瓶(3ml)。

顯色液 B1 瓶(3ml)。

終止液:1 瓶(3ml),2M 硫酸。

樣本稀釋液:1 瓶(10×,  3ml),用于樣品稀釋用。

濃縮洗滌液:1 瓶(20×20ml),用于洗板。

說(shuō)明書(shū)一份。

 

4 需要而未提供的材料

4.1 設(shè)備

4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。

4.1.7微量移液器。

4.2 試劑

4.2.1去離子水或蒸餾水。

4.2.2 甲醇。

5 貯存

試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存

6 注意事項(xiàng)

使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

不要使用過(guò)期試劑盒。

試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。

標(biāo)準(zhǔn)品中含有黃曲霉素,使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。

終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。

不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。

 

7 工作液準(zhǔn)備

 

  • AFT標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
  • 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
  • 樣本稀釋液:備用
  • 顯色劑:已備用,避免光線(xiàn)直照
  • 反應(yīng)終止液:已備用

8 樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作,提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋?zhuān)駝t會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

8.110g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘

8.3Whatman 濾紙過(guò)濾

8.425µl處理后的樣品,加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2

9 酶免分析步驟

9.1 實(shí)驗(yàn)須知

  • 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測(cè)的精確度和準(zhǔn)確度。
  • 使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存
  • 請(qǐng)不要改變分析程序
  • 請(qǐng)使用精確的微量移液器
  • 操作一旦開(kāi)始,請(qǐng)不要中斷任何程序
  • ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作
  • 為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
  • 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

9.2 分析步驟

  • 預(yù)先進(jìn)行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)
  • 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
  • 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(10×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
  • B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液
  • 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50µl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
  • 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
  • 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素B1抗體酶結(jié)合物
  • 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。

9.3 37℃溫浴30min (溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)

9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液

體。

9.4 反應(yīng)

  • 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻
  • 37℃溫浴10min
  • 每孔中加入50µl終止液,混勻
  • 450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
  • 結(jié)果計(jì)算

10.1定量分析

10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

10.1.2以黃曲霉素B1濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線(xiàn)上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為AFT濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中AFT濃度Cng/ml

10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋?zhuān)虼烁鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。

10.2 半定量測(cè)定

10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

  • 特異性

物質(zhì) 交叉反應(yīng)黃曲霉素B1 100% 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30%

12 試劑盒參數(shù)

本試劑盒檢測(cè)下限為0.1ppb B0吸光度*值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。

用本說(shuō)明書(shū)提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。

13試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍為0.1ng/ml~8.1ng/ml

14 分析限制

本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLCGC/MS加以確證。

黃曲霉素試劑盒詳細(xì)說(shuō)明

黃曲霉素(Aflatoxin)ELISA試劑盒--價(jià)格合適,質(zhì)量可靠。

黃曲霉素試劑盒

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