明膠酶譜MMP(2/9)檢測實驗
酶譜法(Zymography) 基于SDS- PAGE電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法檢測MMP-2、MMP-9活性,靈敏度可達10pg,高于ELISA 方法。
基本原理和程序是:以加有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠分離含蛋白酶的樣品,電泳結束后取出凝膠與酶反應Bufer孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區(qū)域,能同時指示MMP-2、MMP-9的位置(酶譜),可檢測樣本有血液、滲出液、細胞提取物等。
服務周期: 10工作日
結果提供:結果報告、代表性圖片,操作流程及相關試劑儀器信息。
明膠酶譜MMP(2/9)檢測實驗樣本提供需知:
1)客戶告知實驗分組、編號及背景設計資料,具體要求請事先說明;
2)標本收集、保存與運送:
①組織樣品:新鮮組織放入液氮或-70 度保存,組織不少于100mg;
②培養(yǎng)細胞:通過細胞計數(shù)取不少于2x106個細胞于EP管,加入0.5ml生理鹽水,混勻后保存于冰箱(-70°C,避免反復凍融) ;
③血液細胞標本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入0.5ml生理鹽水,保存(-70°C可長期保存,避免反復凍融)
④血清或細胞培養(yǎng)液標本:離心去掉雜質后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20 天, -70°C可長期保存,避免反復凍融)
4)樣本運輸:
①組織樣本、細胞樣本以干冰運輸;
②細胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出) ;
③血清或上清液直接加冰袋寄(送視路程遠近2 3天可到達)。
客戶須知:
檢測系統(tǒng)含陽性參照或內參,報價含蛋白提取
實驗注意事項:
1.制備聚丙烯酰胺時應注意排除氣泡 。
2.明膠酶譜的活性受鈣離子,鋅離子,和PH值等因素的影響,因此緩沖液 配制應嚴格準確,盡量用超純水,孵育溫度也掌握好。
3.用大梳子
4.孵育液的PH在7.5-7.6,復性的TRITON時間長了會有絮狀物,所以實驗時盡量使用新鮮配置的。
5.孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中,因為會改變孵育液的PH值,在普通孵箱即可。
6.明膠要4度保存,配好后1周內使用
實驗代做服務:
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