免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經(jīng)典方法，是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)的優(yōu)點。

免疫共沉淀（CHIRP）實驗意義

IncRNA可與蛋白質、DNA和RNA相互作用，實現(xiàn)多樣化功能，CHIRP可以探討IncRNA與其互作的DNA.蛋白質的功能與作用機制，是相關科學研究工作的有力工具。IncRNA的研究在表觀遺傳調控等生命活動中發(fā)揮重要作用，CHIRP是研究

IncRNA的重要技術手段，可在全基因組范圍內鑒定RNA與染色質的互作，并對其進行定性、定量及定位的分析。

免疫共沉淀（CHIRP）實驗原理

CHIRP (Chromatin Isolation by RNA Purification)是通過結合生物素的核酸探針，將目標RNA拉下來,與之共同作用的DNA染色體片段(DNA與蛋白質復合體)就會被吸附下來，后可以通過qRT-PCR. WB.測序分析和質譜分析等檢測RNA. DNA和蛋白質。

CHIRP的實驗流程

①探針設計:設計反義穿核苷酸探針:

②細胞培養(yǎng);

③破碎細胞:

④生物素標記的DNA探針與RNA雜交;

⑤CHIRP;

⑥RNA、DNA及核酸結合蛋白提取; .

⑦分析檢測。,

結果展示

實驗完成周期及交付標準

1.實驗周期: 1-3個月

2.交付標準: CHIRP鑒定結果報告、分析報告、實驗報告(試劑、 耗材、實驗步驟)、原始數(shù)據(jù)等

實驗需與客戶確認的信息

1.目的基因與蛋白信息。

2.樣本類型與種屬

3.是否需要生信分析

注意的問題：

（1）細胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質－蛋白質相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cocktailer。

（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。

（3）使用對照抗體：

單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類單抗

兔多克隆抗體：正常兔IgG

實驗代做服務：