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大鼠促甲狀腺激素(TSH)ELISA試劑盒說明書

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產(chǎn)品名稱:大鼠促甲狀腺激素(TSH)ELISA試劑盒

別名:大鼠TSH試劑盒;大鼠促甲狀腺激素(TSH)ELISA檢測試劑盒;大鼠促甲狀腺激素(TSH)酶免試劑盒;Rat TSH ELISA KIT

                  大鼠促甲狀腺激素(TSH)ELISA試劑盒說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被促甲狀腺激素(TSH)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促甲狀腺激素(TSH)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。

5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

4. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無

標準品(4800μIU/L) 0.5mL 0.5mL 無

標準品稀釋液6mL 3mL 無

樣本稀釋液6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液6mL 3mL 無

封板膜2 張2 張無

說明書1 份1 份無

自封袋1 個1 個無

注:標準品用標準品稀釋液倍比稀釋為:4800、2400、1200、600、300、150μIU/L

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20 稀釋,即1 份的20×洗滌緩沖液加19 份的蒸餾水。

洗板方法

1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5 次。

2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔。標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;待測樣本孔先加樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

3. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

4. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5 次(也可用洗板機洗板)。

5. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。

6. 每孔加入終止液50μL,15min 內(nèi),在450nm 波長處測定各孔的OD 值。

結(jié)果判斷

繪制標準曲線:在Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R 值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0μIU/L。

3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6. 有效期:6 個月

請以隨貨英文說明書為準,中文說明書僅供參考。

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