PAN02 細胞株復蘇失敗原因分析
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產品名稱:PAN02 細胞
中文名稱:小鼠胰腺癌細胞
種屬:人
來源:胰腺癌;雄性;C57BL/6
培養(yǎng)條件:1640
生長狀態(tài):貼壁
PAN02 細胞株復蘇失敗原因分析
大規(guī)模培養(yǎng)技術應用簡介
通過大規(guī)模體外培養(yǎng)技術培養(yǎng)哺乳類動物細胞是生產生物制品的有效方法。20世界60-70年代,就已創(chuàng)立了可用于大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞的微載體培養(yǎng)系統(tǒng)和中空纖維細胞培養(yǎng)技術。近十數(shù)年來,由于人類對生長激素、干擾素、單克隆抗體、疫苗及白細胞介素等生物制品的需求猛增,以傳統(tǒng)的生物化學技術從動物組織獲取生物制品已遠遠不能滿足這一需求。隨著細胞培養(yǎng)的原理與方法日臻完善,動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術趨于成熟。
所謂動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(large-scale culture technology)是指在人工條件下(設定ph、溫度、溶氧等),在細胞生物反應器(bioreactor)中高密度大量培養(yǎng)動物細胞用于生產生物制品的技術。目前可大規(guī)模培養(yǎng)的動物細胞有雞胚、豬腎、猴腎、地鼠腎等多種原代細胞及人二倍體細胞、cho(中華倉鼠卵巢)細胞、BHK-21(倉鼠腎細胞)、Vero細胞(非洲綠猴腎傳代細胞,是貼壁依賴的成纖維細胞)等,并已成功生產了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細胞生成素、單克隆抗體等產品。
在過去幾十年來,該技術經(jīng)有了很大發(fā)展,從使用轉瓶(roller bottle) 、CellCube等貼壁細胞培養(yǎng),發(fā)展為生物反應器(Bioreactor)進行大規(guī)模細胞培養(yǎng)。*代細胞培養(yǎng)技術核心問題是難以產業(yè)化或者說是規(guī)模化生產:一是在工藝生產時不能大規(guī)模制備產品;二是非批量生產容易導致產品質量的不均一性;三是難以對同批生產進行生產和質量控制。
隨著生物技術的發(fā)展,迫切需要大規(guī)模的細胞培養(yǎng),特別是培養(yǎng)表達特異性蛋白的哺乳動物細胞,以便獲得大量有用的細胞表達產物。采用玻璃瓶靜置或旋轉瓶的培養(yǎng)方法,已不能滿足所需細胞數(shù)量及其分泌產物。因而必須為工業(yè)化生產開創(chuàng)一種新的技術方法。自70年代以來,細胞培養(yǎng)用生物反應器有很大的發(fā)展,種類越來越多,規(guī)模越來越大,較常見的細胞培養(yǎng)生物反應器有空氣提升反應器,中空纖維管反應器,無泡攪拌反應器及籃式生物反應器等。八十年代以來,人們逐漸開始以生物反應器培養(yǎng)代替鼠腹水的方法獲得單克隆抗體。
動物細胞是一種無細胞壁的真核細胞,生長緩慢,對培養(yǎng)環(huán)境十分敏感。采用傳統(tǒng)的生物化工技術進行動物細胞大量培養(yǎng),除了要滿足培養(yǎng)過程必需的營養(yǎng)要求外,有必要建立合理的控制模型,進行pH和溶氧(DO)的*控制。細胞生物反應器可通過微機有序地定量地控制加入動物細胞培養(yǎng)罐內的空氣、氧氣、氮氣和二氧化碳四種氣體的流量,使其保持*的比例來控制細胞培養(yǎng)液中的pH值和溶氧水平,使系統(tǒng)始終處于*狀態(tài),以滿足動物細胞的生長對pH值和溶解氧的需要。如為提高或達到一定的溶氧水平可改變通入培養(yǎng)罐內氣體中氧氣和氮氣的比例來實現(xiàn)控制DO值的目的。采用二氧化碳/碳酸氫鈉(CO2/NaHCO3)緩沖液系統(tǒng)來控制培養(yǎng)液的pH值是一種較好的方法。
PAN02 細胞株復蘇失敗原因分析
Farage 人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞 人 彌漫大B淋巴瘤;淋巴結轉移;女性 1640 懸浮
OCI-LY3 人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞 人 彌漫大B淋巴瘤;男性 1640 懸浮
3D4/21 豬肺泡巨噬細胞 豬 肺泡巨噬細胞;SV40轉化;Landrace DMEM 貼壁
HEEpiC 人食管上皮細胞 人 食管;上皮細胞 1640 貼壁
CP70 人卵巢癌細胞 人 卵巢癌;女性 1640 貼壁
KYSE450 人食管癌細胞 人 食管鱗癌;男性 EMEM 貼壁
BNL1MEA.7R.1 小鼠肝上皮細胞 小鼠 肝;上皮細胞 1640 貼壁
HCC-78 人肺腺癌細胞 人 肺腺癌;男性 EMEM 貼壁
SHEE 永生化食管上皮細胞 人 食管;上皮細胞 1640 貼壁
ECV304 人臍靜脈內皮(膀胱癌)細胞 人 膀胱癌 1640 貼壁
HM 人小神經(jīng)膠質細胞 人 小神經(jīng)膠質細胞 DMEM 貼壁
CTV-1 人急性T淋巴細胞白血病細胞 人 急性T淋巴細胞白血病;男性 1640 懸浮
GDM-1 人急性粒細胞白血病細胞 人 急性粒細胞白血病;女性 IMDM 懸浮
DOhh2 人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞 人 人彌漫大B淋巴瘤;男性 1640 懸浮
HBE 人支氣管上皮細胞 人 支氣管;上皮細胞 DMEM 貼壁
LADMAC 小鼠骨髓淋巴細胞 人 骨髓淋巴細胞;C3H DMEM 懸浮
EOC20 小鼠小膠質細胞 小鼠 小膠質細胞; C3H/HeJ DMEM 貼壁
A2058 人黑色素瘤細胞 人 黑色素瘤;淋巴結轉移;男性 DMEM 貼壁
BMSCs 小鼠骨髓間充質干細胞 小鼠 骨髓間充質干細胞 DMDM 貼壁
HuCCT1 人肝內膽管癌細胞 人 肝內膽管癌;男性 DMEM 貼壁
huh28 人膽管癌細胞 人 肝內膽管癌 1640 貼壁
TE354T 人皮膚基底細胞癌細胞 人 皮膚基底細胞癌;女性 DMEM 貼壁
NCI-H820 人乳頭狀肺腺癌細胞 人 乳頭狀肺腺癌;淋巴結轉移;男性 1640 貼壁
CAOV-3 人卵巢腺癌細胞 人 卵巢癌;女性 DMEM 貼壁
HSMC 人骨骼肌細胞 人 骨骼肌 DMEM 貼壁
VSMC 大鼠胸主動脈平滑肌細胞 大鼠 胸主動脈平滑肌 DMEM 貼壁
SNU398 人肝癌細胞 人 肝癌;男性 DMEM 貼壁+懸浮
CCC-HHM-2 人胚心肌組織來源細胞 人 心肌 DMEM 貼壁
HCFB 人心肌成纖維細胞 人 心肌;成纖維細胞 DMEM 貼壁
CCC-HEH-2 人胚心肌組織來源細胞 人 心肌 DMEM 貼壁
MT2 人T淋巴細胞白血病細胞 人 T淋巴細胞白血病 1640 懸浮
HMSC 人骨髓間充質干細胞 人 骨髓間充質干細胞 McCoy’s 貼壁
HL-1 小鼠心房肌細胞 小鼠 心肌;SV40轉化 DMEM 貼壁
TU212 人喉癌細胞 人 頭頸鱗癌 1640 貼壁
SNU-C1 人結腸癌細胞 人 結腸癌;男性 1640 貼壁
HSF 人皮膚成纖維細胞 人 皮膚;成纖維細胞 DMEM 貼壁
M-20 人胚胎皮膚細胞 人 黑色素瘤 DMEM 貼壁
HNEpC 人鼻粘膜上皮細胞 人 鼻粘膜;上皮細胞 1640 貼壁
HFTF 人胚胎眼Tenon's囊成纖維細胞 人 胚胎;眼;成纖維細胞 DMEM 貼壁
MSC 豬骨髓間質干細胞 豬 骨髓間質干細胞 1640 貼壁
SJSA-1 人骨肉瘤細胞 人 骨肉瘤;男性 DMEM 貼壁
MC38 小鼠結腸癌細胞 小鼠 結腸癌;雌性;C57BL/6 1640 貼壁
MeT- 人膜膜間皮細胞 人 膜膜間皮細胞;SV40轉化;男性 DMEM 貼壁
Mousepodocyte 小鼠腎足細胞 小鼠 腎;足細胞 DMEM 貼壁
Ratpodocyte 大鼠腎足細胞 大鼠 腎;足細胞 DMEM 貼壁
兔軟骨細胞 兔 軟骨 DMEM 貼壁
HCM 人心肌細胞 人 心肌 DMEM 貼壁
SU-DHL-6 人彌漫大B淋巴瘤細胞 人 彌漫大B淋巴瘤;腹腔轉移;男性 1640 懸浮
RC-K8 人彌漫大B淋巴瘤細胞 人 彌漫大B淋巴瘤;腹腔轉移;男性 1640 懸浮
NCI-H929 人骨髓瘤細胞 人 骨髓瘤;女性 IMDM 懸浮
RT-112 人膀胱癌細胞 人 膀胱癌;女性 1640 貼壁
HCCLM3 人高轉移肝癌細胞 人 肝癌;男性 DMEM 貼壁
SACC-83 涎腺腺樣囊性癌細胞 人 涎腺腺樣囊性癌 1640 貼壁
SACC-LM 涎腺腺樣囊性癌細胞 人 涎腺腺樣囊性癌 1640 貼壁
Malme-3M 人惡性黑色素瘤細胞 人 黑色素瘤;肺轉移;男性 DMEM 貼壁
HCV-29 人膀胱上皮細胞 人 膀胱癌;男性 1640 貼壁
McA-RH7777 大鼠肝癌細胞 大鼠 肝癌;雌性;Buffalo DMEM 貼壁
HOPC 人少突膠質前體細胞 人 少突膠質前體細胞 1640 貼壁
SNU-5 人胃癌細胞 人 胃癌;女性 1640 懸浮
MiaPaCa-2 人胰腺癌細胞 人 胰腺導管癌;男性 1640 貼壁
BIU-87 人膀胱癌細胞 人 膀胱癌;男性 1640 貼壁
KM12 人結腸癌細胞 人 結腸癌 IMDM 貼壁
NP69 人鼻咽上皮細胞 人 鼻咽;上皮細胞;SV40轉化 1640 貼壁
NCI-H295R 人腎上腺皮質腺癌細胞 人 腎上腺皮質癌;女性 DMEM 貼壁
Karpas-422 人類B細胞非霍奇金淋巴瘤細胞 人 彌漫大B淋巴瘤;女性 1640 懸浮
HMVEC 人肺微血管內皮細胞 人 肺;微血管;內皮細胞 DMEM 貼壁
HPASMC 人肺動脈平滑肌細胞 人 肺動脈平滑肌細胞 DMEM 貼壁
HK-2 人腎小管上皮細胞 人 腎小管;上皮細胞;HPV16轉化;男性 DMEM/F12 貼壁
ECA109 人食管癌細胞 人 食管鱗癌;女性 1640 貼壁
NHDF 正常人皮膚成纖維細胞 人 皮膚;成纖維細胞 DMEM 貼壁
LX-2 人肝星形細胞 人 肝;星形細胞;男性 1640 貼壁
MM.1S 人多發(fā)性骨髓瘤細胞 人 骨髓瘤;女性 IMDM 懸浮
KYSE270 人食管鱗癌細胞 人 食管鱗癌;男性 1640 貼壁
TE-10 人食管癌細胞 人 食管鱗癌;男性 DMEM 貼壁
Nb2 大鼠淋巴瘤細胞 大鼠 惡性淋巴瘤;雄性;Nb 1640 懸浮
C3H/10T1/2 小鼠間充質干細胞 小鼠 間充質干細胞;自發(fā)永生;C3H DMDM 貼壁
MSCs 小鼠臍帶間充質干細胞 小鼠 臍帶;間充質干細胞 DMDM 貼壁
HSC 人雪旺細胞 人 雪旺細胞 DMEM 貼壁
HFLS 人滑膜成纖維細胞 人 滑膜;成纖維細胞 DMEM 貼壁
S180 小鼠肉瘤瘤株 小鼠 小鼠肉瘤 1640 懸浮現(xiàn)在,由于動物細胞培養(yǎng)技術在規(guī)模和可靠性方面都不斷發(fā)展,且從中得到的蛋白質也被證明是安全有效的,因此人們對動物細胞培養(yǎng)的態(tài)度已經(jīng)發(fā)生了改變。許多人用和獸用的重要蛋白質藥物和疫苗,尤其是那些相對較大、較復雜或糖基化(glycosylated)的蛋白質來說,動物細胞培養(yǎng)是的生產方式。60年代初,英國AVRI研究所在貼壁細胞系BHK21中將口蹄疫病毒培養(yǎng)成功后,從zui初的200ml和800ml玻璃容器開始,很快就放大到30L和100L不銹鋼罐的培養(yǎng)規(guī)模。使用的是基于Eagle's配方的培養(yǎng)基,補充5%成年牛血清和蛋白胨。1967年以后,Wellcome(現(xiàn)為Cooper動物保健)集團分布于歐洲、非洲和南美洲8個國家的生產廠商,應用此項技術工業(yè)規(guī)模化生產口蹄疫疫苗和獸用狂犬疫苗,已掌握了5000L的細胞罐大規(guī)模培養(yǎng)技術。
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