人類免疫缺陷病毒1型p24抗原
酶聯(lián)免疫試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
通用名:人類免疫缺陷病毒1型p24抗原酶聯(lián)免疫試劑盒
英文名:ENZYME IMMUNOASSAY FOR DETECTION OF HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS TYPE I P24 ANTIGEN IN HUMAN SERUM, PLASMA AND CELL CULTURE SUPERNATANT
【包裝規(guī)格】
96人份/盒。
【預期用途】
本試劑盒用于人類免疫缺陷病毒1型p24抗原(Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Antigen)的定量檢測,適用于人血清(或血漿)及細胞培養(yǎng)上清液等標本,僅供研究使用。
【檢驗原理】
本產(chǎn)品采用固相酶聯(lián)免疫吸附分析法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測人血清(或血漿)中的游離HIV-1 p24抗原和細胞培養(yǎng)上清液等標本中的HIV-1 p24抗原。本分析方法是基于雙抗體夾心的非競爭性免疫分析。校準品和樣品中HIV-1 p24抗原與固相抗- p24單克隆抗體和生物素標記的抗-p24多克隆抗體通過免疫反應,形成固相抗-p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素復合物;溫育后洗滌,洗去非特異或多余的抗原和多余的生物素標記的抗- p24多克隆抗體;然后加入HRP(Horseradish Peroxidase,辣根過氧化物酶)標記的鏈親和素,形成固相抗- p24單克隆抗體—p24抗原—抗-p24多克隆抗體-生物素—鏈親和素-HRP復合物;溫育后洗滌,洗去多余的HRP標記的鏈親和素。加入TMB-H2O2底物溶液,HRP催化H2O2氧化TMB生成藍色的產(chǎn)物(zui大吸收峰655nm),加入終止液終止酶催化反應,生成黃色產(chǎn)物(zui大吸收峰450nm)。其吸光度與校準品和樣品中的HIV-1 p24抗原濃度成正相關。通過劑量-反應曲線可得出樣品中HIV-1 p24抗原濃度。
試驗類型 | 溫育時間 | 試驗所需時間 | 試驗溫度 | 試驗所需樣本體積 |
免疫度量分析 | 120 分鐘 | 大約150分鐘 | 37°C 和室溫(18~30℃) | 75μL |
【主要組成成份】
(Antibody Coated Microplate) | 1塊 | 包被有鼠抗-HIV-1 p24單克隆抗體的聚苯乙烯微孔板,約200ng/孔。8孔×12條。 鋁箔袋密封包裝,含干燥劑。標簽編號為R1。 |
(HIV-1 p24 Antigen Calibrator) | 1mL×1支 | 重組HIV-1 p24抗原溶液,200IU/mL(約相當于4,000pg/mL),稀釋液為校準品稀釋液。用英國國家生物標準與檢定所(National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC)提供的WHO標準品(HIV-1 p24 Antigen 90/636)校準。 綠色PP蓋子和無色PP塑料管。標簽編號為R2。 |
(Calibrator Diluent) | 20mL×1瓶 | 磷酸鹽緩沖液,含動物血清和鈣化的正常人血漿(經(jīng)ELISA檢測,HBsAg、抗-HCV和抗-HIV 1+2均為陰性),pH約7.3。防腐劑為NaN3(不超過0.1%)和EDTA。 綠色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶。標簽編號為R3。 |
(Biotinylated Antibody) | 5mL×1瓶 | 生物素標記的兔抗-HIV-1 p24多克隆抗體,約4µg/mL。緩沖液為Tris-HCl,含動物血清、穩(wěn)定劑、表面活性劑和綠色染料,pH約7.4。防腐劑為NaN3(不超過0.1%)。 藍色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶。標簽編號為R4。 |
(HRP Conjugated Streptavidin) | 20mL×1瓶 | HRP標記鏈親和素,約0.1µg/mL(25mU/mL HRP)。緩沖液為Tris-HCl,含動物血清、穩(wěn)定劑、表面活性劑和紅色染料,pH約7.4。防腐劑為ProClin®300(不超過1%)。 紅色PP蓋子和棕色HPDE塑料瓶。標簽編號為R5。 |
(Concentrated Wash Buffer) | 50mL×1瓶 | 含表面活性劑的磷酸鹽緩沖液,20倍濃縮。防腐劑為ProClin®300(不超過1%)。 無色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶。標簽編號為R6。
|
(Substrate Buffer) | 10mL×1瓶 | 含H2O2的乙酸鹽緩沖液,pH約5.0。 無色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶。標簽編號為R7。 |
(Chromogen Solution) | 10mL×1瓶 | 含TMB的乙酸溶液,pH約3.0。 白色PP蓋子和棕色HPDE塑料瓶。標簽編號為R8。 |
(Stop Solution) | 10mL×1瓶 | 2mol/L H2SO4溶液。 黃色PP蓋子和無色HPDE塑料瓶。標簽編號為R9。 |
(Plate Sealer) | 6張 | 用于溫育時微孔板的密封。 |
(Instruction for Use) | 1份 | 本產(chǎn)品使用說明。 |
【儲存條件及有效期】
試劑盒置2~8℃保存,有效期為12個月。
【適用儀器】
酶標儀、洗板機、恒溫培養(yǎng)箱等。
【樣本要求】
- 樣本:人血清(或血漿)樣本,和細胞培養(yǎng)上清液等標本。
- 存放:樣本于2~8℃可儲存2天;樣本長期儲存應放置于-20℃或-20℃以下環(huán)境中,且不宜反復凍融5次以上。
【檢驗方法】
- 試劑配制方法
- HIV-1 p24校準品系列的配制:
取6支離心管,編號A、B、C、D、E和F。管F中取900µL校準品稀釋液,加入100µL HIV-1 p24校準品(200IU/mL,4,000pg/mL),混勻,作1:10稀釋,配制成校準品F(20IU/mL,400pg/mL);管E中取500µL校準品稀釋液,加入500µL校準品F,混勻,作1:2稀釋,配制成校準品E(10IU/mL,200pg/mL) ;管D中取500µL校準品稀釋液,加入500µL校準品E,混勻,作1:2稀釋,配制成校準品D(5IU/mL,100pg/mL);管C中取500µL校準品稀釋液,加入500µL校準品D,混勻,作1:2稀釋,配制成校準品C(2.5IU/mL,50pg/mL);管B中取500µL校準品稀釋液,加入500µL校準品C,混勻,作1:2稀釋,配制成校準品B(1.25IU/mL,25pg/mL);以校準品稀釋液作為校準品A。共配制成6個濃度的HIV-1 p24校準品系列(A-F):A 0、B 1.25IU/mL(25pg/mL)、C 2.5IU/mL(50pg/mL)、D 5IU/mL(100pg/mL)、E 10IU/mL(200pg/mL)和 F 20IU/mL(400pg/mL)。配制好的HIV-1 p24校準品系列應保存在2~8°C,于一月內(nèi)使用。
校準品濃度 | 離心管編號 | 校準品稀釋液 | 加入 |
20IU/mL(400pg/mL) | F | 900µL | 100µL R2 |
10IU/mL(200pg/mL) | E | 500µL | 500µL 管 F |
5IU/mL(100pg/mL) | D | 500µL | 500µL 管E |
2.5IU/mL(50pg/mL) | C | 500µL | 500µL 管D |
1.25IU/mL(25pg/mL) | B | 500µL | 500µL 管C |
- 工作濃度洗滌液的配制:
用純水(蒸餾水或去離子水)將濃縮洗滌液稀釋20倍,即為工作濃度洗滌液。工作濃度洗滌液應保存在2~8℃,于一月內(nèi)使用。
- 標準操作方法
- 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板條,裝至微孔板架上。設空白對照1孔,HIV-1 p24校準品A、B、C、D、E和F各2孔,其余各孔為待測樣品,建議每個待測樣品均設置2孔;編號標記。向各孔內(nèi)分別加入25μL的生物素標記抗體(空白對照孔不加),然后再向各孔內(nèi)分別加入75μL的HIV-1 p24校準品或待測樣品,輕輕振蕩微孔板,使內(nèi)容物充分混勻。
- 用封板膜將微孔板密封,置37℃溫育60分鐘。
- 棄去微孔板反應孔內(nèi)液體,每孔(含空白對照孔)加入350μL工作濃度洗滌液,然后將洗滌液棄去。重復洗板共5次,zui后拍干。
- 每孔加 HRP標記鏈親和素100μL(空白對照孔不加),用封板膜將微孔板密封,置37℃溫育30分鐘。
- 棄去微孔板反應孔內(nèi)液體,每孔(含空白對照孔)加入350μL工作濃度洗滌液,然后將洗滌液棄去。重復洗板共5次,zui后拍干。
- 每孔加底物緩沖液和顯色劑各50μL(含空白對照孔),用封板膜將微孔板密封,置室溫(18~30℃)避光溫育30分鐘。
- 每孔加終止液50μL(含空白對照孔),輕輕振蕩微孔板,使內(nèi)容物充分混勻。
- 終止反應后1小時內(nèi),用酶標儀在450nm波長處,測定各孔吸光度值,參考波長選擇620-700nm。
- 數(shù)據(jù)處理
- 求出HIV-1 p24抗原校準品的吸光度平均值。
- 以HIV-1 p24抗原校準品的吸光度平均值為縱軸,以HIV-1 p24校準品的濃度為橫軸,在雙對數(shù)坐標圖上作出標準曲線。
- 如果待測樣品試驗了2孔,求出待測樣品的吸光度平均值。
- 將測得的樣品的吸光度值(或吸光度平均值)在上述標準曲線上求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。也可以通過軟件用zui小二乘法擬合曲線,求出樣品中的HIV-1 p24抗原的濃度。
【檢驗結果的解釋】
- 質(zhì)量控制:空白對照校準品吸光度值不高于0.050,A點(0pg/mL)吸光度值不高于0.100,F點(400pg/mL)吸光度值不低于1.000。
- 對于吸光度值超出校準品F點的樣品,可用校準品稀釋液稀釋適宜倍數(shù)后再行測定,樣本中HIV-1 p24抗原濃度值為稀釋后測定值×稀釋倍數(shù)。
【檢驗方法的局限性】
- 本品僅適用于研究用途,不用于臨床診斷。
- 本品僅適用于游離的HIV-1 p24抗原含量的檢測,不能用于總抗原含量的檢測。
- 樣本pH應保證在5-10之間,過低或過高的pH可能會造成HIV-1 p24抗原的測量值異常。
【產(chǎn)品性能指標】
- 測定范圍:0~400pg/mL。
- 分析靈敏度:zui低檢測限不高于5pg/mL。
- 校準品劑量-反應曲線的線性:線性相關系數(shù)R>0.9900。典型校準曲線如下圖
- 精密性:批內(nèi)變異系數(shù)(Within-Run CV)不高于10%,批間變異系數(shù)(Between-Run CV)不高于15%。
- 特異性:與HIV-1和HIV-2的env蛋白、pol蛋白和gag蛋白中的p17(1型)等無交叉反應。
- 膽紅素(Bilirubin,20mg/dL)、血紅蛋白(Hemoglobin,500mg/dL)和血脂(Triolein, 3,000mg/dL)對HIV-1 p24抗原的測量值無明顯干擾。
- 抗凝劑(肝素0.2mg/mL、檸檬酸鈉100mg/mL和EDTA 20mg/mL)對HIV-1 p24抗原的測量值無明顯干擾。
【注意事項】
- 本品僅適用于研究用途。
- 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,應平衡至室溫(18~30℃)后再使用。未用完的微孔條用自封袋密封保存。
- 儲存和溫育時應避光進行。
- 不得直接用手接觸終止液。若不慎接觸則應立即用大量自來水沖洗。
- 操作應迅速,加樣品時間過長、洗滌后放置太久均可能影響檢測結果的準確性。
- 每次測定均應做標準曲線。
- 操作應按說明書嚴格進行。嚴格控制反應溫度和時間,并盡量使用移液器加樣,結果判定以酶標儀讀數(shù)為準。
- 不同批號試劑請勿混用,不要使用過期試劑。
- 本品含有部分動物源性物質(zhì),操作必須符合國家有關傳染性疾病檢測的實驗室管理及安全的規(guī)定,并按有關實驗室規(guī)程處理所使用組份及樣品。
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【生產(chǎn)企業(yè)】
企業(yè)名稱:上海慧穎生物科技有限公司
地 址:上海市嘉定區(qū)鶴旋路
郵政編碼:201800
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