慧穎提供CAL-51細胞CAL-51細胞,中文名稱:人乳腺癌細胞,來源:美國DSMZ,活力好,狀態(tài)好,復蘇周期1-2周,*!
General information
Cell line: CAL-51細胞
Species: human (Homo sapiens)
Cell type: breast carcinoma
Origin: established from the pleural effusion metastasis of a 45-year-old woman with
progressive breast adenocarcinoma (after radio-, chemotherapy and surgery) in
1985; rare example of tumor cell line with normal karyotype
Reference(s): 14563
Biosafety level: 1
Permissions and A
restrictions:
Cell Culture Data
Morphology: epithelial-like adherent cells growing in monolayers; the culture contains
usually a large amount of cell debris; image; image
Medium: 80% Dulbecco's MEM (4.5 g/L glucose) + 20% h.i. FBS
Subculture: split culture 1:2 once or twice a week using trypsin/EDTA before cells reach
complete confluency; seed out at ca. 3 x 10 6 cells/175 cm 2
Incubation: at 37 °C with 10% CO2
Doubling time: >60 hours
Harvest: cell harvest of ca. 15-20 x 10 6 cells/80 cm 2
Storage: frozen with 70% medium, 20% FBS, 10% DMSO at about 2.5 x10 6 cells/ampoule
Scientific Data
Mycoplasma: negative in DAPI, microbiological culture, RNA hybridization assays
Immunology: cytokeratin +, cytokeratin-7 -, cytokeratin-8 +, cytokeratin-17 -,
cytokeratin-18 +, cytokeratin-19 +, desmin -, endothel -, EpCAM +, GFAP -,
neurofilament -, vimentin +
Fingerprint: multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile
Species: confirmed as human with IEF of AST, LDH, NP
Cytogenetics: human near-diploid karyotype with 28% tetraploidy - 46<2n>XX, no
consistent abnormality detected - rare example of tumor cell line with normal
karyotype - resembles published karyotype
Viruses: ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HHV-8 -,
HIV -, HTLV-I/II -, SMRV -
CAL-51細胞CAL-51細胞培養(yǎng)步驟:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作;將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi),嚴格無菌操作;將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
慧穎生物是一家專業(yè)從事細胞培養(yǎng)相關(guān)產(chǎn)品的公司,擁有獨立細胞房(可隨時約定參觀),供應胎牛血清,無血清細胞凍存液,無血清培養(yǎng)基,常規(guī)培養(yǎng)基,胰酶,雙抗,*培養(yǎng)基,STR鑒定細胞,感受態(tài)細胞等,專業(yè),專注,性價比高,是您Shou選之家。