ST30-3302德國(guó)PAN優(yōu)等胎牛血清
胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡(jiǎn)稱FBS):是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。此時(shí)胎牛各臟器正處生長(zhǎng)分化階段,血中含有豐富的生長(zhǎng)發(fā)育因子,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),一旦胚胎發(fā)育*這些因子自動(dòng)消失。因此8個(gè)月胎齡以上的牛胚胎,已接近足月,不能作為胎牛血清的原料來(lái)使用。
新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡(jiǎn)稱NBCS):采自出生一天~一周內(nèi)的新生牛;
小牛血清(Calf Serum):采自出生10-30天的小牛;
成牛血清(Adult Bovine Serum,簡(jiǎn)稱ABS):采自成年牛收全血后分離得到血清。
所有血清出廠前均應(yīng)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控,并附詳細(xì)《檢測(cè)報(bào)告》,
如pH值、滲透壓、內(nèi)毒素、病毒檢測(cè)、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、無(wú)菌等檢查。
其中,由于內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果影響較大,且不同批次的血清,內(nèi)毒素差異又不易控制。
內(nèi)毒素含量越低的血清,級(jí)別就越高,以胎牛血清為例:
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;
當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;
胎牛血清 在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用:
1. 提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3. 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4. 是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
5. 起酸堿度緩沖液作用。
6. 提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余yi dan bai mei 失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
7. 參與細(xì)胞凍存。
在細(xì)胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(最常見(jiàn)為10%)的。具體到不同試驗(yàn),應(yīng)依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),或細(xì)胞類型或基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成分來(lái)確定最佳濃度。
胎牛血清產(chǎn)品描述:
胎牛血清,是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。其中不含細(xì)胞、纖維蛋白和ning xue yin zi 。
胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)方面通常優(yōu)于其他類型的血清。由于胎牛從未接觸過(guò)外界, 與新生牛和小牛血清相比,抗體含量明顯降低,故抗體與培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)也較低,是理想的細(xì)胞生長(zhǎng)補(bǔ)充劑。
所有胎牛血清均在當(dāng)?shù)卣F醫(yī)部門的監(jiān)督下從注冊(cè)的出口屠場(chǎng)采集,符合國(guó)際動(dòng)物協(xié)會(huì)要求。
為避免不同供體間的個(gè)體差異,能夠更好保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的連續(xù)性和穩(wěn)定,應(yīng)使用同批次血清。
同批次血清:將經(jīng)過(guò)初步檢測(cè)合格的很多供體胎牛的粗血清,混合在一起,在低溫條件下,經(jīng)七次加壓過(guò)濾,最后三次為0.1 µm無(wú)菌過(guò)濾處理,得到淺黃色,澄清,稍粘稠液體。同一批次血清質(zhì)量上基本無(wú)差異。不同廠家一個(gè)批次產(chǎn)量差異較大,從100升到2000升不等。批次大,更利于試驗(yàn)的穩(wěn)定和連續(xù)的可參照性。
所有血清出廠前,均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)控,每個(gè)批次附有詳細(xì)完整的《檢測(cè)報(bào)告》,包括:品名,貨號(hào),批號(hào),血源地,生產(chǎn)日期,保質(zhì)期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無(wú)菌檢查(細(xì)菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等)、促細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。
胎牛血清儲(chǔ)存條件:
-20°C凍存。
胎牛血清解凍后,應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。
若置于4°C的血清,應(yīng)在一周內(nèi)用完。
為保證細(xì)胞培養(yǎng)的最佳效果,血清和培養(yǎng)基的配置,應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配"原則。配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。
血清避免反復(fù)凍融,避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過(guò)久,否則會(huì)破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。
胎牛血清是否要熱滅活:
shouxian胎牛血清不推薦熱滅活。
熱滅活一般是指在做免疫相關(guān)的試驗(yàn)中,通過(guò)加熱滅活掉血清中的補(bǔ)體,以避免對(duì)免疫試驗(yàn)的影響。
在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會(huì)真正干預(yù)免疫試驗(yàn)。故不需滅活。
并且,熱滅活反而可能導(dǎo)致胎牛血清中部分重要的生長(zhǎng)因子的活性衰減,進(jìn)而影響細(xì)胞培養(yǎng)效果。
若針對(duì)某些特殊試驗(yàn),對(duì)于胎牛血清一定要做熱滅活,國(guó)際上推薦熱滅活的方法:40℃水浴,20min。
胎牛血清融化方法:
血清融化 專業(yè)方法:
目的;更好保留血清中活性成分,使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定。
推薦國(guó)際血清廠家 專業(yè)融化方法(此方法國(guó)際通用,適用于所有種類的血清):
操作 | 溫度 | 100ml | 500ml | 1000ml |
第一步 | 室溫 | 35 min | 90 min | 100 min |
或15-20℃水浴 | 5 min | 18 min | 20 min | |
第二步 | 20℃水浴 | 15 min | 25 min | 30 min |
第三步 | 37℃水浴 | 20 min | 35 min | 45 min |
注意:
?在水浴過(guò)程中,血清的平面要沉浸在水中。在融化過(guò)程中要慢慢搖動(dòng)瓶身,使血清混勻,但搖動(dòng)中盡量不要產(chǎn)生泡沫!
胎牛血清 使用說(shuō)明
血清從-20℃取出后,融化,按推薦體積加入到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,混勻,制備成新鮮培養(yǎng)基。(整個(gè)操作需在無(wú)菌超凈臺(tái)中進(jìn)行,注意無(wú)菌操作。)配置好的培養(yǎng)基推薦在4℃保存,應(yīng)在1周內(nèi)用完。
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