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1.什么是RIPA裂解液？
RIPA裂解液（Radio Immunoprecipitation Assay Lysis buffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細(xì)胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細(xì)胞膜（包括核膜），從組織或細(xì)胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB、IP、co-IP等實(shí)驗(yàn)。
2.RIPA裂解液里有什么？
RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細(xì)胞膜和蛋白間的相互作用等方式裂解組織或細(xì)胞；蛋白酶抑制劑可有效抑制各類蛋白酶的活性，避免蛋白過度降解；磷酸酶抑制劑可有效抑制去磷酸化作用。各組分具體作用見表1。
值得注意的是，由于RIPA裂解液中含有一些穩(wěn)定性相對(duì)較弱的酶類抑制劑，故應(yīng)放在-20℃保存。其中PMSF的穩(wěn)定性極弱，半衰期只有0.5 h，所以必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
表1.RIPA裂解液里的成分及其作用
| 分類 | 名稱 | 作用 |
| 有效裂解成分 | Sodium Deoxycholate | 陰離子去垢劑；能夠有效破壞多種蛋白間的相互作用 |
| 1%Triton X-100 | 非離子型表面活性劑；溶解脂質(zhì)，增加細(xì)胞膜的通透性 | |
| 0.1% SDS | 表面活性劑和還原劑；有增溶作用 | |
| 1% NP-40 | 溫和的非離子型去垢劑；可破壞掉細(xì)胞膜，獲得胞漿蛋白，對(duì)核膜的破壞作用較弱 | |
| 蛋白酶抑制劑 | PMSF | 抑制絲氨酸蛋白酶：胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶 抑制半胱氨酸蛋白酶：木瓜蛋白酶 |
| Leupeptin | 抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶：胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纖溶蛋白酶、纖溶酶和組織蛋白酶B | |
| Aprotinin | 抑制絲氨酸蛋白酶：抑制纖維蛋白溶解、激肽釋放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶 不抑制凝血酶或凝血因子X | |
| Pepstatin | 抑制天冬氨酸蛋白酶、胃蛋白酶、腎素、組織蛋白酶D、凝乳酶、多種微生物酸性蛋白酶 | |
| EDTA-Na | 抑制金屬蛋白酶 | |
| 磷酸酶抑制劑 | NaF | 有效抑制去磷酸化作用 |
| Na3VO4 | 有效抑制去磷酸化作用 | |
| Beta-glycerophosphate | 有效抑制去磷酸化作用 | |
| Na2PO4 | 有效抑制去磷酸化作用 |
3.RIPA裂解液有哪些種類？
目前市面上的裂解液根據(jù)其主要裂解成分等不同大致分為強(qiáng)、中、弱等幾類。表2列舉了翊圣生物提供的四種RIPA裂解液，可滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。
表2.翊圣生物的四種RIPA裂解液及其基本特點(diǎn)
| 貨號(hào) | 20101 | 20114 | 20115 | 20118 |
| 名稱 | RIPA裂解液（強(qiáng)） | RIPA裂解液（弱） | RIPA裂解液（中） | 免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 |
| 主要用途 | WB IP | WB IP Co-IP | WB IP | WB IP Co-IP |
| 有效裂解成分 | 1%Triton X-100， 1% Sodium Deoxycholate， 0.1% SDS | 1% NP-40， 0.25% Sodium Deoxycholate | 1% NP-40， 0.5% Sodium Deoxycholate， 0.1% SDS | 1%Triton X-100 |
| 裂解強(qiáng)度 | 強(qiáng) | 溫和 | 中 | 溫和 |
| 提取膜蛋白 | 很好 | 一般 | 較好 | 一般 |
| 提取胞漿蛋白 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 提取核蛋白 | 很好 | 較好 | 較好 | 較好 |
| 提取胞漿磷酸化蛋白 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 提取細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 含蛋白酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 含磷酸酯酶抑制劑 | 是 | 是 | 是 | 是 |
4.如何選擇合適的RIPA裂解液？
如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP，我們建議您使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)，該裂解液在裂解細(xì)胞或組織后一般不會(huì)形成粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊，不必采用超聲處理就可進(jìn)行下一步操作。同時(shí)，該裂解液還適用于磷酸化蛋白的WB檢測(cè)。
如果使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)的效果不是很好，那您的蛋白可能比較特殊，我們建議您可以嘗試另外幾種裂解液。如果您的蛋白是難溶性的蛋白，建議您可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液，如RIPA裂解液(強(qiáng)/中)；如果您在做IP實(shí)驗(yàn)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)背景很高，即有很多非特異性蛋白被IP下來，這時(shí)候您需使用裂解強(qiáng)度較強(qiáng)的裂解液，比如RIPA裂解液(強(qiáng)/中)。反之，如果您發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法IP下來，則說明您使用的裂解液強(qiáng)度過強(qiáng)，此時(shí)需使用裂解強(qiáng)度較弱的裂解液，比如RIPA裂解液(弱)。
5. RIPA裂解液適用于哪些細(xì)胞？
幾乎適用于所有實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞和各種組織。包括各種懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞及動(dòng)物組織等。
6. 如何判斷細(xì)胞的裂解程度？
細(xì)胞裂解：加入RIPA后，充分裂解的細(xì)胞，沒有細(xì)胞沉淀，很粘稠。如果像渾濁的水一樣粘性很小則可能是裂解液得量加太多導(dǎo)致的；相反，如果RIPA裂解液后出現(xiàn)膠狀物體，離心不能沉淀則可能是蛋白太多，RIPA裂解液加入的量太少導(dǎo)致的。
組織裂解：先將組織剪成細(xì)小的碎片，之后利用勻漿器或超聲破碎的方法，鏡檢顯示細(xì)胞破碎率大于90%，同時(shí)組織已經(jīng)*裂解，沒有明顯的小組織塊。之后按照細(xì)胞裂解的步驟進(jìn)行裂解，裂解程度的判斷標(biāo)準(zhǔn)與細(xì)胞裂解一致。
RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則需通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。
7. RIPA儲(chǔ)存出現(xiàn)白色沉淀，為什么？
一般是由于裂解液中SDS在儲(chǔ)存的時(shí)候沉淀析出導(dǎo)致，這時(shí)只需將裂解液放置于37℃水浴加熱后恢復(fù)室溫即可使用。
8. RIPA裂解液可以獲得細(xì)胞中的不同蛋白嗎？
RIPA裂解液提取的是全蛋白，包括核蛋白、漿蛋白、膜蛋白等。如果要提取特定的蛋白（如：核蛋白、膜蛋白）則可利用專門提這類蛋白的試劑盒進(jìn)行提取。
紙上得來終覺淺，覺知此事要躬行。小翊在這里給出的建議僅供大家參考，具體裂解液的選擇和使用，還需要根據(jù)您自己的實(shí)驗(yàn)需求和實(shí)驗(yàn)效果選擇您實(shí)驗(yàn)的RIPA裂解液。
9.訂購(gòu)信息
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格（元） |
| RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（強(qiáng)） | 20101ES60 | 100 mL | -20℃ | 228 |
| RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱） | 20114ES60 | 100 mL | -20℃ | 228 |
| RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中） | 20115ES60 | 100 mL | -20℃ | 228 |
| Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液 | 20118ES60 | 100 mL | -20℃ | 228 |
10.相關(guān)產(chǎn)品推薦
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
| 蛋白酶抑制劑Cocktail，EDTA-free，迷你型，片劑 | 20123 | 1瓶（10片） | 468 |
| 蛋白酶抑制劑Cocktail，EDTA-free，100× DMSO儲(chǔ)液 | 20124 | 1 mL | 217 |
| 磷酸酶抑制劑混合物（100×，儲(chǔ)存液） | 20109 | 2 mL | 207 |
| 細(xì)胞核/細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 | 20126 | 50 T | 598 |
| 細(xì)胞膜/細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒 | 20127 | 50 T | 508 |
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