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20101ESRIPA裂解液(強)RIPA Lysis Buffer
參考價: 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 20101ES 產品型號
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  • 生產商 廠商性質
  • 上海市 所在地

訪問次數:1463更新時間:2024-07-26 10:42:17

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產品簡介
供貨周期 現貨 貨號 20101ES
應用領域 生物產業,制藥
RIPA裂解液(強)RIPA Lysis Buffer,其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一種傳統的細胞組織快速裂解液,對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、IP等實驗。
產品介紹

RIPA裂解液(強)RIPA Lysis Buffer

產品信息

產品名稱

產品編號

規格

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價格(元)

RIPA裂解液(強)RIPA Lysis Buffer

20101ES60

100ml

-20

230

產品描述

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一種傳統的細胞組織快速裂解液,對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、IP等實驗。

RIPA裂解液的主要成分為50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,并含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制劑,可以有效抑制蛋白降解。

運輸與保存方法

冰袋(wet ice)運輸。

-20保存,一年有效。盡量避免反復凍融,建議分裝后使用。

注意事項

1)需自備PMSF。

2)裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4進行。

3)用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度(YEASEN CAT NO.20201ES76)。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明:

() 培養細胞樣品:

1. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。

2. 貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。

懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。

3. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200μl250μl。

(二)組織樣品:

1. 把組織|剪切成細小的碎片。


2. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。

3. 按照每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

5. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注:RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正?,F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-kappaBp53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。  





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