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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 20101ES60 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
RIPA Lysis Buffer (Strong)
RIPA裂解液（強）
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
RIPA lysis buffer (strong) RIPA裂解液（強） | 20101ES60 | 100 mL | -20℃ | 228.00 |
產品描述
RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），其本意是Radio Immunoprecipitation Assay，是一種傳統的細胞組織快速裂解液，對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用。根據其裂解液的強度不同，大致可以分為強、中、弱三類。
本品為裂解強度相對較強的RIPA裂解液（強），含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、IP等實驗。
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。-20℃保存，一年有效。盡量避免反復凍融，建議分裝后使用。
注意事項
1）裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
2） 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（Cat NO.20201ES76）。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
一、培養細胞樣品
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
2. 貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。細胞充分裂解后應無沒有明顯的細胞沉淀。
懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成0.5-1×106個細胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150 μL裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
二、組織樣品
1. 把組織|剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
【注】RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正?，F象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。
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