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iFluor™ 488標記鬼筆環肽（綠色）iFluor™ 488 phalloidin

產品信息

背景描述                                                                                                

鬼筆環肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin，而不會與單體肌動蛋白G-actin結合，通常用來標記組織切片、細胞培養物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin進行定性和定量分析。另外，鬼筆環肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略，染色區域和非染色區域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關研究。另外鬼筆環肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發生反應；鬼筆環肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。

鬼筆環肽（Phalloidin）的結合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩定微絲結構，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發生的臨界濃度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品為iFluor^TM 488標記的鬼筆環肽，可發出高亮度、光穩定的綠色熒光，染色反應特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。iFluor^TM 488 鬼筆環肽染色與用于細胞分析的其他熒光染色*兼容，包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他iFluor^TM偶聯物（包含iFluor^TM偶聯二抗）。另外，經本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛。

本品以1000×儲存液形式（溶于DMSO）提供。

產品性質

運輸與保存方法

冰袋運輸。收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。

注意事項

1. 鬼筆環肽具有毒性，需小心操作（對人的半數致死劑量LD₅₀約2mg/kg）。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

需要自備材料

1. 1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細胞培養級別（貨號：60145ES76）

2. 固定液4%多聚甲醛（不含甲醇）（溶于PBS緩沖液）（貨號：36314ES60）

3. 透化液Triton X-100（溶于PBS緩沖液）

4. BSA，標準級別（貨號：36101ES25）

5. DAPI染液（即用型）（貨號：40728ES50）

操作步驟

1. 1×工作液準備

吸取1µl 1000×iFluor^TM 488標記鬼筆環肽（溶于DMSO）到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

注：1）使用前需將1000×DMSO iFluor^TM 488鬼筆環肽儲存液分裝并于-20℃避光干燥保存。

2）不同的細胞染色不同，相應iFluor^TM 488鬼筆環肽使用量也需根據不同情況而定。

1. 染色步驟

2. 細胞培養24h或更長，使其密度達到50-60%匯合度。

3. 吸掉培養液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。

4. 使用溶于PBS的4%進行細胞固定，室溫固定10-30min。

注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

1. 室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。

2. （可選）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min，從而增加其通透性。

3. 室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。

4. 取足夠量新鮮配好的 iFluor^TM 488標記鬼筆環肽工作液以覆蓋住細胞，如：100µl/孔（96孔板），室溫避光染色20-90min。

5. 用PBS清洗細胞3次，每次5min。

6. （可選）：加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進行復染，如：100µl/孔（96孔板），室溫3~5min。用PBS清洗細胞2次，每次5min。

7. 于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇iFluor^TM 488激發/發射濾片（Ex/Em=493/517nm）和/或DAPI激發/發射濾片（Ex/Em=364/454nm）。

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