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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 10ku |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10626ES10 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格 |
T7 RNA Polymerase（250 U/μL） | 10626ES10 | 10 KU | 1,875.00 |
10626ES60 | 100 KU | 11,265.00 |
產品描述
本產品是大腸桿菌重組表達來源的噬菌體T7 RNA聚合酶，以含有T7啟動子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，合成與啟動子下游的反向單鏈DNA互補的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板，因此線性質粒、PCR產物均可用作體外合成RNA的模板。
注：G*為RNA轉錄的第一個堿基。
產品性質
來源（Source） | 重組E. coli |
最適溫度（Optimum Temperature） | 37℃ |
宿主核酸殘留（Host Nucleic acid Residue） | <10 fg/U |
宿主蛋白殘留（Host Protein Residue） | <50 ppm |
RNA酶殘留（RNase Residue） | 陰性 |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0.1% Triton X-100，50%（v/v）甘油，pH7.9@25℃ |
活性單位定義（Unit Definition） | 在 37℃、pH8.0 的條件下，1 h內使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位。 |
【注】：具體產品質檢數據及更多指標請查看批次質檢報告。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | |
10626ES10 (10 KU) | 10626ES60 (100 KU) | ||
10626-A | T7 RNA polymerase (250 U/μL) | 40 μL | 400 μL |
10626-B | 10×Transcription Buffer | 500 μL | 1 mL×5 |
【注】：10×Transcription Buffer中含460 mM MgCl2和100 mM DTT，但不含有NTP，如需請購買本翌圣產品Cat#10133。
產品應用
1. 單鏈 RNA合成（包括mRNA，siRNA，gRNA等各類RNA前體，以及同位素標記或非同位素標記的RNA探針）。
2. 以（Cap analog）為引物合成Capped mRNA。
運輸和保存方法
干冰運輸。-20℃保存，有效期一年。
注意事項
1. DNA模板的種類：推薦使用含T7啟動子的線性化質粒和PCR產物作為模板。
2. 轉錄模板的純度會顯著影響體外轉錄反應。在質粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會顯著影響轉錄RNA的質量。通過酚-氯仿抽提的質粒DNA為最佳模板；PCR產物建議采用膠回收純化后使用。
3. 在20 μL反應體系中加入0.02 U熱穩定無機焦磷酸酶可顯著提高轉錄產量。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
應用實例
按下列體系配制反應體系
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus) | 2 | 1× |
CTP/GTP/ATP/UTP (100 mM each) | 0.4 each | 2 mM each |
T7 RNA Polymerase (250 U/μL) | 0.8 | - |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 | - |
RNase free H2O | Up to 18 | - |
模板DNA | 2 (100 ng-1μg) | - |
注： 1) DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺，亞精胺濃度過高會引起DNA模板沉淀。
2) Buffer和水建議放置到室溫，然后開始使用，反應于室溫下配制，防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。
3) 若轉錄長度< 100 nt，模板投入量可增加至2 μg。
4) RNase inhibitor (40 U/μL)請購買翌圣產品Cat#10603。
5) 為了特定區域的有效轉錄，建議在其區域下游把模板DNA預先切成平端或5′突出末端。
2. 在37℃下反應1-2 h（若轉錄長度≤ 100 nt，增加時間至4-8 h）。
3. 反應結束后，使用2 U DNaseⅠ（無RNase）37℃、15 min去除DNA模板。
4. 轉錄產物純化：體外轉錄產物可選用RNA Cleaner磁珠進行純化（翌圣產品Cat#12602），以去除蛋白、鹽離子和其他雜質。也可以采用酚/氯仿純化法（具體操作步驟可聯系翌圣索取）。
HB220325
