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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 生物產業 |
|---|
產品介紹
產品描述
Oligo dT 磁珠為表面包被有Oligo dT的1 μm磁性聚合物微球，具有單分散和磁響應性強等特點。磁珠通過Oligo dT與真核生物mRNA的poly A尾結構互補配對，快速高效從總RNA、細胞裂解物和帶有poly A的體外轉錄RNA樣本中分離純化mRNA。純化的mRNA可用于RT-PCR、cDNA文庫構建、RACE、探針雜交和轉錄組測序等應用。
產品性質
基質 | 聚合物磁珠 |
配體 | Oligo dT |
平均粒徑 | 1 μm |
磁核 | Fe3O4 |
殼層 | 聚合物 |
磁性類型 | 超順磁性 |
應用方向 | mRNA分離純化 |
應用方式 | 手動/自動 |
dA30結合量 | >300 pmol/mg 磁珠 |
mRNA結合量 | ~2 μg/mg磁珠 |
磁珠濃度 | 10 mg/mL |
保存溶液 | PBS, pH 7.4, 0.05% Proclin-300 |
保存條件 | 4℃ |
保質期 | 2年 |
運輸和保存方法
冰袋運輸。4℃儲存，有效期2年。
注意事項
1. 磁珠嚴禁冷凍，否則可能導致磁珠碎裂，影響mRNA 純化效果。
2. 所有用于mRNA提取的buffer和耗材都應該是RNase-free，操作過程中應佩戴一次性手套和口罩避免RNase的污染。
3. 磁珠取用前應恢復至室溫，且充分混勻。
4. 若總RNA樣本降解嚴重，無法得到高質量的mRNA。
5. 磁珠用量相對于樣本量不可過低，否則會導致mRNA回收率低和rRNA殘留過高。
6. 磁吸時間不應少于1min，磁吸后吸棄上清液時避免損失磁珠。
7. 洗脫時可能存在磁珠殘留，吸取樣本時應盡量避免吸入磁珠。
8. 提取到的mRNA最好立即用于RT-PCR。如果需要保存，建議將mRNA從磁珠上洗脫下來，可在洗脫液中添加RNase抑制劑，-80℃凍存。
實驗前準備
1. 自配試劑
試劑名稱 | 組分 |
結合液 | 20 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1.0 M LiCl, 2 mM EDTA |
洗滌液 | 10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 0.15 M LiCl, 1 mM EDTA |
洗脫液 | Nuclease-Free Water 或 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 |
注：所有試劑都使用DEPC水配制，為避免磁珠粘附管壁可在結合液和洗滌液中添加終濃度為0.01%的Tween-20。
2. 自備設備和耗材：磁性分離架，水浴鍋或金屬浴，冰浴，漩渦振蕩器，旋轉混合儀，1.5 mL離心管(RNase-free)，微量移液器及吸頭(RNase-free)。
3. 將磁珠恢復至室溫，且充分重懸。
4. 設置水浴鍋或金屬浴為65℃。
操作方法
以使用50 μL磁珠，從100 μg總RNA中純化mRNA為例?？梢愿鶕颖居昧堪幢壤M行調整。
1. 使用DEPC水將100 μg總RNA的體積調整為100 μL。
注：若總RNA的濃度低于1 μg/μL，可增加樣本體積，并調節步驟6的結合液用量和樣本體積相同；或者直接使用100 μL樣本，以下步驟不變。
2. 將上述總RNA樣本于65℃變性處理5 min，立即置于冰浴。
3. 吸取50 μL均勻重懸并恢復至室溫的Oligo dT磁珠于1.5 mL離心管(RNase-free)，磁吸，吸棄保存液。
4. 使用100 μL結合液重懸磁珠，磁吸，吸棄上清液。
5. 重復步驟4。
6. 使用100 μL結合液重懸磁珠。
7. 將步驟2中處理好的總RNA樣本加入磁懸液中，混勻，室溫旋轉混合10 min。
8. 磁吸，吸棄上清液。
9. 使用200 μL洗滌液重懸磁珠，磁吸，吸棄上清液。
10. 重復步驟9。
注：使用10 μL移液器吸頭盡量吸棄上清液。
11. 加入20-100 μL洗脫液，吹打重懸磁珠，室溫混勻5min，磁吸，將純化的mRNA溶液轉移至新的EP管(RNase-free)。
注：65℃-75℃加熱洗脫，可增加洗脫效率。
檢測分析
總RNA中mRNA的含量一般為1%-5%, 可以使用Nanodrop或Qubit測量純化的mRNA濃度。
可以使用RT-qPCR或Agilent 2100 Bioanalyzer及配套的試劑檢測rRNA殘留情況。
HB230106
