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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
|---|
該前處理試劑盒可與本公司的多種宿主細胞DNA殘留（qPCR法）檢測試劑盒配合使用，包括CHO宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41301ES)、HEK29
產品介紹
MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit適用于生物制品樣本中殘留DNA檢測的前處理。采用的磁珠和精心優化的緩沖體系，可最大限度的分離純化樣本中的微量宿主細胞殘留DNA。
該前處理試劑盒可與本公司的多種宿主細胞DNA殘留（qPCR法）檢測試劑盒配合使用，包括CHO宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41301ES)、HEK293宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41302ES/41306ES)、Vero宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41303ES)和E.coli殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41304ES/41308ES)、SV40LTA&E1A殘留DNA檢測試劑盒(Cat#41310ES)和復制型慢病毒(RCL)檢測試劑盒(Cat#41311ES)等。
產品組分
類別 | 組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | |
18464ES25 (25T) | 18464ES60 (100T) | |||
Part I | 18464-A | 蛋白酶K（20 mg/mL） | 0.5 mL/支×1支 | 1 mL/支×2支 |
Part Ⅱ | 18464-B | 磁珠懸浮液 | 0.5 mL/支×1支 | 1 mL/支×2支 |
18464-C | 裂解液 | 2.5 mL/瓶×1瓶 | 10 mL/瓶×1瓶 | |
18464-D | 結合液 | 10 mL/瓶×1瓶 | 40 mL/瓶×1瓶 | |
18464-E | 洗滌液A* | 8 mL/瓶×1瓶（需加12 mL乙醇） | 32 mL/瓶×1瓶（需加48 mL乙醇） | |
18464-F | 洗滌液B* | 4 mL/瓶×1瓶（需加16 mL乙醇） | 16 mL/瓶×1瓶（需加64 mL乙醇） | |
18464-G | 洗脫液 | 2.5 mL/瓶×1瓶 | 10 mL/瓶×1瓶 | |
Part Ⅲ | 18464-H | 糖原 | 225 uL/支×1支 | 900 uL/支×1支 |
18464-I | Poly A鉀鹽 | 150 uL/支×1支 | 600 uL/支×1支 | |
運輸和保存方法
1.Part I組分冰袋運輸，4℃可保存1年，長期保存于-20℃。
2.Part II組分室溫運輸，室溫保存，有效期1年。
3.Part Ⅲ組分干冰運輸，-20℃保存1年。
4. 收到貨后，請檢查Part I、Part II和Part Ⅲ共3個組分是否齊全，并立即放入對應的保存溫度中儲存。
注意事項
1. 使用前請詳細閱讀使用說明書，嚴格按照使用說明書操作，樣本處理建議在超凈臺或生物安全柜中進行。
2. 注意觀察常溫保存溶液是否有析出或渾濁（尤其冬季室溫為低溫環境時），可37℃水浴至溶液澄清，避免影響使用效果。
3. 洗脫時可能存在磁珠殘留，吸取樣本時應盡量避免吸入磁珠。
4. 處理樣本及加樣時，勤換槍頭，避免交叉污染。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
6. 本產品僅作科研用途。
實驗前準備
1. 自備設備：漩渦振蕩器、水浴鍋或金屬浴、離心機、磁性分離架、杭州奧盛Auto-Pure32A自動化核酸提取儀或其他品牌全自動化核酸提取儀。
2. 自備耗材：10μL-1000μL不等的低吸附帶濾芯槍頭、1.5 mL低吸附離心管、PCR 8連管或96孔板及相應的管蓋或覆膜。
3. 自備試劑：無水乙醇（分析純）、1×PBS緩沖液（pH 7.4，無Mg2+和Ca2+）、超純水。
【注】：推薦您購買本公司的超純水(Cat#10116ES)。
4. 使用時，需在洗滌液A*和洗滌液B*瓶中加入標簽或說明書中注明體積的無水乙醇，充分混勻后使用，并做好標記。
每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持瓶中的乙醇含量。
一、手工提取操作方法
1. 樣本處理
1.1 待測樣本為疫苗等本身含有較高的核酸含量的樣本，可用1×PBS（pH 7.4，無Mg2+和Ca2+）對樣本進行適當比例稀釋后提取（對樣本進行稀釋是為了保證檢測的準確性，使樣本的檢測值在標準曲線線性范圍內，稀釋倍數通常不超過100倍）。
1.2 待測樣本為干粉時，可用超純水將樣本稀釋至10~100 mg/mL后使用。
1.3 待測樣本為復雜背景基質時，可根據需要進行加標回收實驗，以確定合適的樣本稀釋倍數。
2. 取100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋混勻10 sec后短暫離心。
【注】：樣本蛋白濃度0~100 mg/mL，蛋白酶K用量為10 μL；樣本蛋白濃度100~200 mg/mL，蛋白酶K用量為20 μL。
3. 將離心管置于60℃孵育30 min，75℃孵育15min。
【注】：若金屬浴升溫較快，可在同一個金屬浴上孵育；若升溫慢，則需提前準備2個金屬浴，并將溫度分別調至60℃和75℃。
4. 孵育完成后，加入400 μL結合液、9 μL糖原和6 μL Poly A鉀鹽渦旋混勻。
5. 加入20 μL磁珠懸浮液，渦旋混勻后，放置10 min，每隔2 min渦旋混勻10 sec。
【注】：磁珠使用前需渦旋混勻，保證磁珠重懸。在一次性加樣4~5次后，建議再次混勻后再行加樣。
6. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1~2 min，待磁珠吸附，小心吸棄液體。
7. 加入700 μL洗滌液A（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），渦旋混勻1 min，確保磁珠分散，離心管壁無聚集磁珠。
8. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1~2 min，待磁珠吸附，小心吸棄液體。
9. 加入700 μL洗滌液B（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），渦旋混勻1 min，確保磁珠分散，離心管壁無聚集磁珠。
10. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1~2 min，待磁珠吸附，小心吸取棄體。
11. 為保證盡量吸出殘留液體，可將離心管快速離心10 sec后，置于磁力架上用10 μL移液器吸出殘留液體。
12. 打開管蓋，室溫或37℃放置5~10 min，直至乙醇揮發，磁珠表面無反光至剛出現龜裂即可，不可過度干燥。
13. 將離心管從磁力架上取下，加入100 μL 65℃預熱的洗脫液，振蕩混勻后短暫離心，65℃孵育5 min，期間振蕩混勻1次。
14. 短暫離心后，將離心管放置于磁力架上靜置約2 min，待磁珠吸附后，小心將DNA溶液轉移至新的離心管中，保存于-20℃，長期保存需放置于-80℃。
二、半自動化提取操作方法
配套本公司自動化儀器使用，以32通道核酸提取儀為例。不同品牌和型號的儀器，試劑加入方式可能會有差別，本公司技術人員。
1.樣本處理
1.1 待測樣本為疫苗等本身含有較高的DNA含量的樣本，可用1×PBS（pH 7.4，無Mg2+和Ca2+）對樣本進行適當比例稀釋后提取（對樣本進行稀釋是為了保證檢測的準確性，使樣本的檢測值在標準曲線線性范圍內，稀釋倍數通常不超過100倍）。
1.2 待測樣本為干粉時，可用超純水將樣本稀釋至10~100 mg/mL后使用。
1.3 待測樣本為復雜背景基質時，可根據需要進行加標回收實驗，以確定合適的樣本稀釋倍數。
2. 取100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋混勻10 sec后短暫離心。
【注】：樣本蛋白濃度0~100 mg/mL，蛋白酶K用量為10 μL；樣本蛋白濃度100~200 mg/mL，蛋白酶K用量為20 μL。
3. 將離心管置于60℃孵育30 min，75℃孵育15 min，得到預處理樣本，待用。
4. 按照下表向96孔深孔板中加入相應試劑：
位置 | 試劑名稱 | 用量/孔 |
第1/7列 | 預處理樣本 | 200 µL |
結合液 | 400 µL | |
糖原 | 9 µL | |
Poly A鉀鹽 | 6 µL | |
第2/8列 | 洗滌液A* | 700 µL |
第3/9列 | 磁珠懸浮液 | 20 µL |
洗滌液B* | 700 µL | |
第6/12列 | 洗脫液 | 100 µL |
【注】：
磁珠懸浮液使用前需在渦旋混勻儀上充分重懸或充分顛倒混勻，在一次性加樣4~5次后，建議再次混勻后再行加樣。
不同品牌和型號的儀器，試劑加入方式可能會有差別本公司技術人員。
5. 將上述96孔板正確安放置核酸提取儀器中，并放置八聯磁棒套。
6. 運行如下程序，程序結束后，將洗脫板轉移至新的離心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃長期保存。
32通道核酸提取儀器的提取程序
步驟 | 孔位 | 混合 時間(min) | 吸磁 時間(sec) | 等待 時間(min) | 容積(μL) | 混合速度(1~10) | 溫度(℃) | 混合位置(0~100%) | 混合幅度(1~100%) | 吸磁位置(0~100%) | 吸磁速度(1~10) |
移磁珠 | 3 | 0.2 | 40 | 0 | 700 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
結合 | 1 | 12 | 80 | 0 | 600 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
清洗1 | 2 | 2 | 30 | 0 | 700 | 8 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
清洗2 | 3 | 1.5 | 30 | 4 | 700 | 8 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
洗脫 | 6 | 8 | 80 | 0 | 100 | 8 | 65 | 0 | 80 | 0 | 1 |
棄磁珠 | 3 | 0.2 | 0 | 0 | 700 | 5 | / | 0 | 80 | 0 | 1 |
【注】：
設置程序時，在“選項"一欄中選擇“分9段磁吸"和“升溫動作同步"。
上述提取程序為推薦程序，用戶可根據儀器品牌型號及自身需求進行相應調整，詳情可咨詢本公司技術人員。
