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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
|---|
產品介紹
產品簡介
白細胞介素17（IL-17）家族蛋白包括六個成員（IL-17/IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E/IL-25和IL-17F），是分泌的結構相關蛋白，在C末端附近共享保守的胱//氨酸結折疊，但在N末端具有相當大的序列差異。除了作為非共價連接二聚體存在的IL-17B外，所有IL-17家族成員都是二硫鍵連接的二聚體。IL-17家族蛋白是誘導局部細胞因子產生并參與免疫功能調節的促炎細胞因子。IL-17調節NF-κB和促分裂原活化蛋白激酶的活性。這種細胞因子可以刺激IL6和環氧合酶-2（PTGS2/COX-2）的表達，并增強一氧化氮（NO）的產生。高水平的IL-17與幾種慢性炎癥性疾病有關，包括類風濕性關節炎、銀屑病和多發性硬化癥。
翌圣Mouse IL-17A/F Heterodimer ELISA(酶聯免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿中的小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白(Mouse IL-17A/F Heterodimer)。特異性抗小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經過孵育，樣本中存在的小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后，加入檢測抗體孵育結合，經洗滌，再加入酶結合物(Streptavidin-HRP)孵育結合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白的濃度成正比。加入終止液終止反應，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
產品信息
貨號 | 98010ES48 / 98010ES96 |
規格 | 48 T / 96 T |
檢測范圍 | 46.88-3000 pg/mL |
檢測方法 | 雙抗夾心法 |
檢測物種 | 小鼠 |
檢測時長 | 4.5小時 |
靈敏度 | 12.18 pg/mL |
稀釋線性 | 80 - 124% |
回收率 | 78 - 122% |
板內差 | 4.9% |
板間差 | 6.6% |
實驗數據
標曲數據
濃度（pg/mL） | 顯色值 | 平均值 | 校準值 | |
3000 | 2.032 | 2.086 | 2.059 | 2.057 |
1500 | 1.263 | 1.283 | 1.273 | 1.283 |
750 | 0.738 | 0.784 | 0.761 | 0.744 |
375 | 0.381 | 0.430 | 0.406 | 0.413 |
187.5 | 0.203 | 0.237 | 0.220 | 0.224 |
93.75 | 0.112 | 0.125 | 0.118 | 0.121 |
46.88 | 0.068 | 0.069 | 0.069 | 0.067 |
0 | 0.011 | 0.010 | 0.010 | / |
數據擬合繪制標準曲線，生成的標曲用于實驗數據分析。
標準曲線圖
靈敏度檢測
IL-17A/F Heterodimer的 檢測限為12.18 pg/mL，通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。
精密度檢測
酶標板內精密度
3個已知濃度的樣本酶標板內重復測定6次，評估酶標板內的精密度。
酶標板間精密度
3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測20次，評估酶標板間的精密度。
項目 | 板內精密度 | 板間精密度 | ||||
樣本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
6 | 6 | 6 | 20 | 20 | 20 | |
平均值 | 1398.32 | 321.12 | 77.48 | 1403.42 | 325.91 | 77.59 |
標準差 | 87.86 | 16.57 | 2.44 | 105.95 | 19.59 | 4.86 |
變異系數（%） | 6.3 | 5.2 | 3.2 | 7.5 | 6.0 | 6.3 |
回收率檢測
通過不同水平的IL-17A/F Heterodimer添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:
樣本類型 | 平均回收率(%) | 范圍（%） |
血清 | 97.4 | 90.7-106.1 |
血漿 | 99.9 | 78.4-122.6 |
細胞培養上清 | 92.1 | 82.7-107.5 |
稀釋線性檢測
血清稀釋比例 | 平均期望值(%) | 范圍（%） |
1:02 | 110.5 | 98.6-124.4 |
1:04 | 107.2 | 89.0-120.3 |
1:08 | 105.8 | 95.4-111.4 |
1:16 | 99.7 | 84.4-108.6 |
血漿稀釋比例 | 平均期望值(%) | 范圍（%） |
1:02 | 97.1 | 95.3-100.2 |
1:04 | 91.0 | 80.4-99.0 |
1:08 | 86.8 | 79.6-95.1 |
1:16 | 89.3 | 87.0-91.7 |
細胞培養上清稀釋比例 | 平均期望值(%) | 范圍（%） |
1:02 | 102.2 | 98.4-106.5 |
1:04 | 99.1 | 93.8-102.6 |
1:08 | 95.8 | 90.2-102.8 |
1:16 | 92.5 | 86.2-97.3 |
樣本值
應用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
樣本類型 | 樣本數目 | 平均值（pg/mL） | 樣本值（pg/mL） |
血清 | 6 | n.d. | n.d. |
血漿 | 4 | 64.5 | n.d.-132.6 |
細胞培養上清 | 4 | n.d. | n.d. |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內得46.88 pg/mL
測定特異性
本試劑盒識別天然和重組小鼠白介素17A/F 異二聚體蛋白。下述因子進行了特異性的評估，沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。
Recombinant human: | Recombinant Mouse: | |
GM-CSF | IL-10 | GM-CSF |
IFN-γ | IL-12 | IFN-γ |
IL-1α | IL-17A | IL-1α |
IL-1β | IL-18 | IL-1β |
IL-2 | IL-23 | IL-4 |
IL-4 | TNF-α | IL-6 |
IL-5 | IL-10 | |
IL-6 | TNF-α | |
檢測簡圖
疑問解答
問題 | 造成原因 | 解決方法 |
標曲不好 | 移液量不準確 | 檢查移液器，按時校準，仔細操作，充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
稀釋方法不恰當 | ||
顯色值偏低 | 孵育時間太短 | 給予足夠的孵育時間，樣本和溶解的標準品隔夜后更換。 |
移液量不足或稀釋不當 | 校準移液器和規范操作 | |
CV偏高 | 酶標板清洗不當 | 使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機，檢查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 | 準備新鮮洗液 | |
靈敏度較低 | 試劑盒儲存不當 | 按照產品組分表進行保存。 |
