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產品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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產品介紹
產品簡介
游離膽//固//醇(FC)是構成細胞膜的主要成分，也是合成性激素、膽汁酸、維生素D和腎上腺皮質激素等物質的重要原料，FC濃度可作為脂代謝的指標。本試劑盒的檢測方法是微量法，既可以用可見分光光度計檢測，也可以用酶標儀檢測。該產品的檢出限是0.119 μmol/mL，線性范圍為0.125-6 μmol/mL。
作用原理是FC氧化酶可催化FC生成4-膽甾烯酮和H2O2，過氧化物酶催化H2O2、4-氨基安//替//比//林和酚生成紅色醌類化合物，其在500 nm有吸收峰，顏色深淺與FC含量成正比。作用方式如下：
測定總膽//固//醇(TC)請選擇60723ES 總膽//固//醇(TC)含量檢測試劑盒；測定游離膽//固//醇(FC)請選擇60724ES 游離膽//固//醇(FC)含量檢測試劑盒。
產品信息
貨號 | 60724ES60 |
規格 | 100 T |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 規格 | 儲存條件 |
60724-A | 工作液 | 20 mL | 2~8℃ |
60724-B | 標準品 | 10 mg | 2~8℃ |
儲存條件
2~8℃保存，有效期6個月。
使用說明
【注意事項】實驗之前建議選擇3個預期差異大的樣本做預實驗，如果樣本吸光值不在測量范圍內，建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和溶劑：
可見分光光度計/酶標儀、天平、低溫臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、可調式移液槍、EP管、蒸餾水和異丙醇。
溶液的配制：
1）自備提取液異丙醇：大約需要110 mL，常溫保存；試劑盒內提供一個30 mL棕色空瓶，僅做分裝使用。
2）標準品溶液的配置：10 mg膽//固//醇使用前加入517 μL提取液，振蕩溶解后即為50 μmol/mL的膽//固//醇標準溶液，2~8℃可保存4周。
3）標準溶液的稀釋：取50 μmol/mL膽//固//醇標準液20 μL ，加入480 μL異丙醇，充分混勻，配制成2 μmol/mL的標準液。注意2 μmol/mL標準液最好現配現用，實驗中每管需10 μL，但為減小實驗誤差，故配制體積偏大。
3. 操作步驟
1）樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
a. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液）進行冰浴勻漿。8000 g，4℃離心10 min，取上清置冰上待測。
b. 細菌/細胞：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1 mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300 w，超聲2秒，間隔3秒，總時間3 min）；然后 8000 g，4℃離心10 min， 取上清置于冰上待測。
c. 血清（漿）等液體樣本：直接測定，若有沉淀請離心后取上清待測。
2）測定步驟
a. 可見分光光度計/酶標儀預熱30 min以上，調節波長至500 nm，分光光度計蒸餾水調零。
b. 按需取出一定量的工作液，37℃水浴預熱30 min。
c. 在1.5 mL EP管/96孔板按下表步驟加樣
試劑名稱（µL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
異丙醇 | 10 | - | - |
標準液 | - | 10 | - |
待測上清 | - | - | 10 |
工作液 | 190 | 190 | 190 |
充分混勻，室溫靜置15 min，反應完成后測定500 nm處吸光值A，分別記為A測定、A標準和A空白，ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準管只需測1-2個。注：若樣本為血清，則空白管中的提取液（異丙醇）需要更換為蒸餾水進行實驗。 | |||
總膽//固//醇含量計算
a. 血清（漿）中 FC 含量計算：
FC含量（μmol/dL）=C標準液×（A測定-A空白）÷（A標準-A空白）×100=200×（A測定-A空白）÷（A標準-A空白）
b. 組織或細胞、細菌中 FC 含量計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：FC含量（μmol/mg prot）=C標準液×（A測定-A空白）÷（A標準-A 空白）×V樣總÷（Cpr×V樣總）=2×（A測定-A空白）÷（A標準-A空白）÷Cpr
（2）按樣本質量計算：FC 含量（μmol/g 質量）=C 標準液×（A測定-A空白）÷（A標準-A空白）×V樣總÷W=2×（A測定-A空白）÷（A標準-A空白）÷W
（3）按細胞/細菌數量計算：FC 含量(μmol/104 cell）=C 標準液×(A測定-A空白）÷（A標準-A空白）×V樣總÷N=（A測定-A 空白）÷（A標準-A空白）
C 標準液：標準液的濃度，2 μmol/mL；V 樣總：加入提取液的體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；100：單位換算系數，1 dL=100 mL；500：細菌或細胞數量，500萬；N：細胞數量，以萬計。
4. 實驗實例：
取 0.1 g 大鼠肝臟加入 1 mL 提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，使用 96孔板測得A空白=0.046、A標準=0.354、A測定=0.127，按樣本質量計算含量得：
FC含量（μmol/g 質量）=2×（A測定-A空白）÷（A標準-A空白）÷W =5.320 μmol/g 質量。
注意事項
如果樣本吸光值大于1.2，建議將樣本用提取液稀釋后進行測定。
提取液中含有使蛋白變形的成分，故按蛋白濃度計算時需要重新提取蛋白進行測定。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產品僅作科研用途！
