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通用 RT-PCR 試劑盒(AMV)
貨號:RP1200
規格:50T/100T
保存:-20℃保存,避免反復凍融,復檢期為 1 年。
產品內容:
試劑盒組成 | 50 次 | 100 次 |
AMV(10U/ul) | 50ul | 100ul |
10×AMV Buffer | 100ul | 200ul |
Oligo(dT) 16 (10uM) | 100ul | 200ul |
DTT(200mM) | 75ul | 150ul |
RNasin(40U/ul) | 25ul | 50ul |
dNTPs(10mM) | 100ul | 200ul |
Taq Polymerase(5U/ul) | 25ul | 50ul |
10×PCR Buffer | 250ul | 500ul |
MgCl 2 (25mM) | 200ul | 500ul |
RNase-free ddH 2 O | 1ml | 2ml |
說明書 | 1份 | 1份 |
產品簡介:
本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉錄反應以及隨后的 PCR 擴增。它采用 AMV 進行反轉錄反應,能夠獲得更長的反轉錄產物。同時,在 20ul 反轉錄體系和 50ul PCR 反應體系中,還可以一次性得到足夠量的 PCR 產物用于后續的克隆實驗。
本試劑盒中配置的酶均為進口的酶。RT 酶采用進口的 AMV,所以 cDNA 更長,基因的信息保留得更完整! 反轉錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導致實驗失敗的風險。 本試劑盒使用方便、快捷,可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測等分子生物學實驗。
操作步驟:
一、反轉錄反應
1、在冰浴的無 RNase 的離心管中加入如下反應成分:
2-5ug 總 RNA 或 50-500ng mRNA
2ul Oligo(dT) 16 或 2 pmole基因特異性引物
補RNase-free ddH 2 O 14.5ul
2、65℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 2min,簡短離心收集反應液后加入以下各組分:
2ul 10×AMV Buffer
1ul dNTPs
0.5ul RNasin
1ul AMV
1ul DTT
3、42℃溫浴 60min,如果是用隨機引物,請先將離心管置 25℃溫浴 10min,再 42℃溫浴 60min。
4、95℃加熱 5min 終止反應,置冰上進行后續實驗或-20℃保存。
二、PCR 反應
1、按以下各組分配制 50ul PCR 反應體系:
10×PCR Buffer 5ul
MgCl 2 4ul
dNTPs 1ul
上游引物(用戶自備 10um) 1ul
下游引物(用戶自備 10um) 1ul
RT 反應產物 1-2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH 2 O x ul
Total Volume 50ul
2、混勻后短暫離心,PCR 儀擴增,瓊脂糖凝膠電泳觀察結果。
注意事項:
1、 用于 cDNA 合成反應的相關試劑和耗材盡可能用 DEPC 進行處理,并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時,先用經過滅菌的器具、水等配制溶液后,再將溶液進行過濾除菌處理。
2、 RNA 樣品要避免反復多次凍融,應使 RNA 在冰浴中處于融化狀態。
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通用 RT-PCR 試劑盒(AMV)運輸說明:
1、極低溫產品:極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品:低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產品的性質穩定如一,為您的實驗保駕護航。
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