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含有緩沖成分的移動相基本上可以通過兩種途徑來配制:
在與有機(jī)相組分混合前完成包括pH調(diào)節(jié)步驟在內(nèi)的所有緩沖溶液配置過程。
在緩沖溶液和有機(jī)相組分混合之后調(diào)節(jié)總?cè)芤簆H值。
在水溶液體系中pH是一個(gè)很好確定的參數(shù),但是在含有部分有機(jī)相的溶劑中pH值就沒那么好確定了,或者說質(zhì)子濃度就不容易測準(zhǔn)了。
因此建議在配制緩沖水溶液時(shí),就調(diào)好pH值,用規(guī)格為0.4微米的濾膜過濾后再同有機(jī)相組分混合。需要注意以下幾點(diǎn):
pKa值兩側(cè)+/-1范圍內(nèi)是zui有效的緩沖區(qū)域,以此為參考選擇正確的緩沖系統(tǒng)。
如果需要將高濃度緩沖液同有機(jī)相組分混合,請考慮緩沖溶質(zhì)沉淀析出的可能性。
在使用前總是選用規(guī)格為4微米的濾膜對緩沖液進(jìn)行過濾。
注意純水相緩沖液中細(xì)菌和真菌滋生的可能性。
在加入有機(jī)相組分時(shí),整體溶液pH值通常會產(chǎn)生一些漂移,無機(jī)緩沖體系(例如磷酸鹽)的pH值會有所上升,而有機(jī)緩沖體系(例如乙酸)pH值則會有所下降。
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