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900次小鼠(Mouse)尿激酶型纖溶酶原激活物ELISA試劑盒
本試劑僅供研究使用
試驗原理:
u-PA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知u-PA濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將u-PA和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中u-PA的濃度呈比例關系。
試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) | 96孔配置 | 48孔配置 | 配制 |
96/48人份酶標板 | 1塊板(96T) | 半塊板(48T) | 即用型 |
塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 | 即用型 |
標準品:40ng/ml | 1瓶(0.6ml) | 1瓶(0.3ml) | 按說明書進行稀稀 |
空白對照 | 1瓶(1.0ml) | 1瓶(0.5ml) | 即用型 |
標準品稀釋緩沖液 | 1瓶(4.0ml) | 1瓶(2.0ml) | 即用型 |
生物素標記的抗u-PA抗體 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
親和鏈酶素-HRP | 1瓶(8.0ml) | 1瓶(4.0ml) | 即用型 |
洗滌緩沖液 | 1瓶(20ml) | 1瓶(10ml) | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
底物B | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
終止液 | 1瓶(6.0ml) | 1瓶(3.0ml) | 即用型 |
標本稀釋液 | 1瓶(12ml) | 1瓶(6.0ml) | 即用型 |
自備材料
安全性
操作注意事項
樣品收集、處理及保存方法
試劑的準備
40 ng/ml | (6號標準品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
20 ng/ml | (5號標準品) | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
10 ng/ml | (4號標準品) | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
5.0 ng/ml | (3號標準品) | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
2.5 ng/ml | (2號標準品) | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
1.25 ng/ml | (1號標準品) | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
0 ng/ml | (空白對照) | 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。 |
操作步驟
建議使用的實驗方案
| 標準品濃度(ng/ml) |
| ||||||||||
A | 40 | 40 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
B | 20 | 20 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
C | 10 | 10 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
D | 5.0 | 5.0 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
E | 2.5 | 2.5 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
F | 1.25 | 1.25 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
G | 0 | 0 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
H | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 | 樣品 |
局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的u-PA標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的u-PA含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍:0-40ng/ml
4、敏感度: 0.1 ng/ml
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