靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞培養基（無飼養層培養）
ReproFF2
特點
●　一周只需處理細胞三次
●　只需常規培養基用量的一半
●　維持干細胞的未分化狀態
●　維持干細的分化能力

靈長類胚胎干細胞/誘導多能干細胞培養基（無飼養層培養）

ReproFF2 

 

 

◆特點

 

●　一周只需處理細胞三次

●　只需常規培養基用量的一半

●　維持干細胞的未分化狀態

●　維持干細的分化能力

注1）由于不含bFGF，請在培養人iPS/ES細胞時添加。

※保存溫度：-20℃

※含有醫藥用以外的劇毒物0.0008％的2-巰.基乙醇

 

 

◆優勢

 

●　反復凍融的細胞依然保持存活。

●　具有長期培養核型穩定性。

●　轉移培養基后細胞傳代培養狀態穩定。操作簡便。

●　iPS細胞系菌落完整且免疫染色為陽性

 

 

◆產品概念：周末無需處理

 

 

 

◆無飼養層ReproFF2培養基對干細胞未分化狀態的維持

 

維持人iPS細胞的未分化狀態的培養

 

●　使用201B7株人iPS細胞

●　ReproFF2（無飼養層）培養：Passage 10.day 3

●　飼養層培養：Passage 48.day 3

 

 

1.菌落的形態和堿性磷酸酶活性的確認

 

　　圖為使用ReproFF2無飼養層培養的細胞和有飼養層培養的細胞有著相似的菌落形態和堿性磷酸酶活性陽性。

 

　　把細胞移到ReproFF2培養基后，可能會出現細胞狀態惡化的情況，但繼續傳代培養的話，狀態就會穩定下來。

 

 

2.未分化標記物的免疫染色結果

 

　　用ReproFF2無飼養層培養的人iPS細胞和有飼養層培養的細胞相似，都能表達Oct3/4,Nanog,SSEA-1,TRA-1-60。

 

 

 

3.未分化標記物的FACS分析

 

　　用ReproFF2培養基無飼養層培養的人iPS細胞和有飼養層培養的細胞顯示了相似的陽性率。

 

 

 

4.長期培養時核型的穩定性

 

　　對使用ReproFF2連續培養到第30代的人iPS細胞的核型進行分析。結果顯示， ReproFF2培養基適合穩定長期的無飼養層培養。

 

 

 

5.人ES細胞的未分化維持培養

 

　　使用KhES-1株人ES細胞

　　使用ReproFF2無飼養層培養的人ES細胞顯示為堿性磷酸酶染色陽性、Oct3/ 4陽性、未分化性得到良好的維持。

 

 

 

◆使用ReproFF2培養基培養人iPS細胞時，菌落狀態不好的情況

 

　　ReproFF2雖然是適合培養人ES/iPS細胞的培養基，但是，根據培養操作等狀況的不同，有時會出現菌落狀態惡化的情況。

　　如出現以下所述的情況是沒有問題的，請遵從下文指示放心繼續培養細胞。

 

 

細胞移到ReproFF2培養基后菌落的形態

 

　　把細胞移到ReproFF2培養基后，可能會出現細胞狀態惡化的情況（見下左圖）。

　　繼續進行傳代培養的話，狀態將會穩定下來（見下右圖），請繼續第4代的傳代培養。

細胞移到ReproFF2培養基的第三天                  傳代培養到第四代的第六天

（狀態差的菌落）                                               （恢復狀態的菌落）

 

 

使用ReproFF2培養基傳代后的情況（傳代時菌落太小的情況）

 

　　傳代培養后，下左圖的細胞可能是傳代培養時菌落過小的情況。

　　解決方法：減少移液的次數或者降低移液管的強度。

  傳代培養時，菌落太小　                           菌落在200-300um中傳代培養

                                                                          （菌落大小恢復正常）

 

 

◆ReproFF2培養基無飼養層培養的人iPS細胞的分化能力

 

　　使用ReproFF2培養的人iPS細胞和有飼養層培養的細胞相似，都有向心肌細胞和神經細胞分化的能力。

 

 

人iPS細胞向心肌細胞的分化

 

　　把使用ReproFF2無飼養層培養的人iPS細胞向心肌細胞誘導分化，結果得到表達心肌標記物陽性的跳動心肌細胞團。

　　由此得出，使用ReproFF2無飼養層培養的人iPS細胞和有飼養層培養的細胞一樣，擁有向心肌細胞分化的能力。

 

 

※α-MHC, Connexin-43, Cardiac Troponin T: 心肌標記物

 

 

人iPS細胞向神經前體細胞、神經細胞的分化

 

　　使用ReproFF2無飼養層培養的人iPS細胞向神經細胞誘導分化，形成玫瑰花結構（rosette），可以觀察到βIII-tubulin的表達以及TH陽性的神經細胞。

　　由此得知，使用ReproFF2無飼養層培養的人iPS細胞和有飼養層培養的細胞一樣，擁有向神經細胞分化的能力。

※βIII-tubulin：神經纖維的標記物

※rosette：神經前體細胞的標記物形態的特征
※TH (Tyrosine 3-Hydroxyrase)：多巴胺能神經元細胞的標記物

 

 

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產品編號	產品名稱	規格
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